非病毒基因载体PAMAM-HA聚合物体外细胞毒性的系列研究详解.doc

非病毒基因载体,李晓琳(,梁双红 （广东药学院,生命科学与生物制药学院广东 广州 510006） 【摘要】目的：研究非病毒基因载体聚酰胺胺型树状大分子-透明质酸（PAMAM-HA）的体外细胞毒性。方法：对已合成的多种PAMAM-HA聚合物，采用MTT法、流式细胞技术凋亡检测法，检测其对不同细胞的细胞毒性和诱导细胞凋亡的能力。结果：各聚合物的细胞毒性与聚合物溶液的浓度、聚酰胺胺型树状大分子（polyamidoamine,PAMAM）的代数及透明质酸（HA）的接枝量和接枝密度有关；聚合物中-HA3850-5%、 -HA3850-5%可以诱导肝癌细胞Bel-7402细胞凋亡。结论：经不同接枝量和接枝密度的HA修饰的PAMAM，细胞毒性降低，聚合物-HA3850-5%和-HA3850-5%的细胞毒性略大，并且可以诱导肿瘤细胞凋亡。 【关键词】PAMAM；肿瘤细胞；；细胞凋亡 biological activity of a non-viral gene vector PAMAM-HA polymer Hu Haimei, Li Xiaolin, Liang Shuanghong (School of Life Science and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China) ) [Abstract]: Objective: Study on the cytotoxicity of PAMAM-HA as a non-viral gene vector in vivo. Methods: Our laboratory had been synthesized various polymers PAMAM-HA. MTT assay was used to evaluate the cytotoxicity of various polymers on different cells. Flow cytometry technique apoptosis assay was used to determine polymer PAMAM-HA inducing apoptosis on cell. Results: The cytotoxicity of each polymers was related to the concentration of the polymer ,the molecular weight of PAMAM and incubating time; Polymer PAMAM G4-HA3850-5%和-HA3850-5% may induce apoptosis in Bel-7402 cell.Conclusion: PAMAM modified by the grafting density and quantity of the graft of HA can reduced the cytotoxicity; Polymer PAMAM G4-HA3850-5% and PAMAM G5-HA3850-5% had higher cytotoxicity and may induce apoptosis. [Keywords]: PAMAM; HA; tumor cells; cytotoxicity; apoptosis 非病毒载体主要有阳离子聚合物、阳离子多肽和阳离子脂质体等[1-4]，具有靶向性，低细胞毒性，较高的安全性，并且易于进行结构修饰等优点，已成为基因治疗中的热点[5,6]。聚酰胺-胺型树状大分子（PAMAM）由Tomalia等[7]人首次成功合成后，关于PAMAM的研究才逐步展开。PAMAM表面带正电荷的氨基基团可与带负电的DNA相互作用形成复合物，可以保护DNA免受核酸酶降解[8-10]，作为药物载体和基因载体具有较高的稳定性、生物兼容性良好、无免疫源性、使用剂量下低细胞毒性的优势[11-13]。但是， PAMAM的表面具有大量的带正电荷的氨基，易与带负电荷的细胞膜静电相互作用致使细胞凋亡[14-16] ，具有一定的细胞毒性，并且会随着其代数的增加使细胞毒性增加，因此对PAMAM末端基团进行表面修饰，减少表面正电荷数目，以降低其细胞毒性[17,18]。透明质酸（Hyaluronic,简称HA），具有生物兼容性良好、非免疫原性、高生物活性及易被体内酶作用而天然降解、靶向性[19]等优势。因此本研究选择HA修饰PAMAM载体，以减少PAMAM的细胞毒性，增强生物相容性，提高PAMAM的靶向性。已合成含有不同接枝量（HA3850、HA17200）和接枝密度（5%、