微生物与基因工程方案.pptVIP

经过体外基因操作和包装后形成重组 噬菌体，可以通过正常的感染途径进 入宿主细胞； 重组噬菌体DNA也可不经过体外包装 而直接通过转染（转化）方式进入宿 主细胞； 质粒和噬菌体载体都可用于 构建基因文库； 但后者更有优势： 容纳的外源DNA片段较大； 以感染途径进入宿主细胞的 效率比转化高； 三、柯斯质粒载体 柯斯质粒载体 （cosmid vector）， 又称粘粒，是由λ 噬菌体的粘性末端 和质粒构建而成。 Cosmid (cos site-carrying plasmid) 带有粘性末端位点( cos) 的质粒 特点： 1）具有λ噬菌体的特性：在克隆了外源片段后可在体外被包装成 噬菌体颗粒，高效地感染对λ噬菌体敏感的大肠杆菌细胞。进 入寄主的柯斯质粒DNA分子，按照λ噬菌体DNA的方式环化， 但无法按噬菌体的方式生活，更无法形成子代噬菌体颗粒。 2）具有质粒载体的特性：在寄主细胞内如质粒一样进行复制，携 带有抗性基因和克隆位点，并具氯霉素扩增效应。 3）具有高容量的克隆能力：柯斯质粒本身一般只有5～7kb左右， 而它克隆外源DNA片段的极限值竟高达45kb，远远超过质粒载 体及λ噬菌体载体的克隆能力。同时，由于包装限制，柯斯质 粒载体的克隆能力还存在一个最低极限值。例如， 5 kb大小的 柯斯质粒载体，插入的外源片