生化技术：11蛋白质(酶、抗体)标记1讲课.pptVIP

2.随机引物介导法制备生物素酰化探针 （三）两种新标记法 扫若仑标记和分子灯塔探针 1.扫若仑标记 扫若仑（psoralen）是一种天然的三环化合物，其带有胺活性基团衍生物可用来标记多种核酸（如DNA、RNA、PCR产物和寡核苷酸等）。用其制成的探针灵敏度高（可达fg级别） 扫若仑标记为非酶促反应，是用波长320~400nm的紫外光照射，引起光循环反应，使带胺基的扫若仑以三环平面形式插入核酸分子，并以共价键结合形成探针，DNA和RNA时，共价键结合的位置分别在dT和U处；探针中扫若仑衍生物的含量与核酸中胸苷（ dT ）或尿苷（U）的含量成正比关系 2.分子灯塔探针 概念 用新的非核素化合物标记，用于检测特别序列核酸的核酸探针 特征 ①由25个核苷酸组成 ②灯中间环形的15个核苷酸与靶DNA是互补序列；灯竿一端的5个核苷酸与另一端的5个核苷酸是互补 ③在5’ 和3’端分别耦合一种荧光素（发光剂）和非荧光素（熄灭剂） 分子灯塔探针的熄灭剂可吸收发光剂发射的能量。在室温条件下，分子灯塔的构型可确保发光剂和熄灭剂紧密互补结合，致使荧光基团处于熄灭状态，无荧光产生；一旦当灯塔探针的15个核苷酸与靶DNA或RNA序列杂交时，其发光剂和熄灭剂便相互分离，产生荧光 三、核素标记 标记核酸的核素有32P、33P、35S和3H。其中 32P是制备高比活度放射