07(实验)碘标记物的纯化与鉴定NEW.ppt

实验步骤 将滤纸条浸于1%KI溶液中过夜，次日取出晾干。 从无孔端用铅笔以1cm等距离画10~12条线。 在第一线出点样5~10ul125I标记物晾干。 将此滤纸条放入层析槽中，使末端浸于展开剂中约5mm 2小时候取出纸条晾干，然后沿线剪开，分别放入相应试管中编号标记。 每管内加入0.5mlH2O,并记录数据及作图。 实验结果 下面将以管号为横坐标，每管的cpm为纵坐标作图。 ALB EPO 实验计算及分析 如图所示： ALB的放化纯度= cpm1+cpm2+cpm3 cpm总 ×100% ≈65% EPO的放化纯度= cpm1+cpm2+cpm3 cpm总 ×100% ≈90% 分析：ALB放化纯度＜90%可能原因为：①层析时间不足，未充分分离 ②样品过期，有杂值出现。EPO放化纯度=90%，结果较理想。 注意事项 1、点样时要轻快，点样面积要尽量小 2、各层析纸应标明点样名称及有效期 3、层析时间要充分，需1.5小时或以上 4、展开时，标记物切勿侵入展开剂中 凝胶过滤法 葡聚糖凝胶过滤法 琼脂糖凝胶过滤法 聚丙烯酰胺过滤法 分类 示意图注意事项： 根据抗原分子量选择凝胶和层析柱 层析柱要新鲜制备 选择合适的洗脱液，洗脱速度不超过0.5ml/分 多数标记抗原在分离纯化前先用蛋白（BSA或RSA）保护 洗脱液用部分收集器收集，所用的试管应先用蛋白处理 有时须经