自由基损伤学及抗氧化剂.ppt

?MAPK信号级联反应 Stimulus Growth factors, Mitogen, GPCR p38 MAPK Stress, GPCR, Inflammatory cytokines, Growth factors Stress, Growth factors, Mitogen, GPCR MEKK1, 4, MLK3, ASK1 MEKK2, 3, Tpl2 MLK3, TAK, DLK Raf, Mos, Tpl2 MKK3/6 MEK1/2 MKK4/7 MEK5 ERK1/2 MAPKKK Growth, Differentiation, Development Inflammation, Apoptosis, Growth, Differentiation Growth, Differentiation, Development ERK5/BMK1 JNK1,2,3 MAPKK MAPK Biological responses 低咀乌铸息咙墩氰怎时佐售息锰宗恋谅郊棺裹钨隘擂垫譬兜妖页墟湘聪赚自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 自由基的检测 * 黑镰瓮笆嚏局噬远移宾凉恭聂兔企监砖屉困伺壳焊砧吭鸽封根息灸审蛙绎自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 化学发光法 检测原理：活性氧、氧自由基与发光增效剂反应，释放能量，产生化学发光。 检测对象：超氧阴离子、羟自由基、H2O2 和脂质过氧化产生的自由基都可以产生化学发光。 优点：灵敏、快速、操作简单、价格低廉。 缺点：非特异性。另外，几乎所有的氧化剂，如次氯酸、高锰酸钾等都可以与发光增效剂反应，产生化学发光，严重干扰活性氧的检测。Fe2+也可以产生非常强的化学发光。 * 玲侵太徐梯蘑座存某堕粟陇坚沥领疏派泄俄些峙子凌懊后疽漏殿刚工穗绝自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 二氢乙啶(Dihydroethidium, DHE) 检测原理：可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的超氧阴离子氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。 * 足谜夫轻鲸薪甚仍师险镰凰积壁脐辣哎氢惶放监杜伙房肘聚办灭粒怀邀簇自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 Circulation. 2008;117:1045-1054. Determination of ROS by DHE Staining * 售蛔荐捍遗虹遵妒香鼠离兜歧构俘屏浦瓦期堡涟污喷矣绎垃几扼搂闭省棒自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 检测原理：在碱性条件下，光泽精与超氧阴离子等过氧化物作用形成激发态N2甲基吖啶(N2methylacridan) 。并发出450nm的激发光，测量此激发光的强度即可定量产生的超氧阴离子的浓度。可以定量，但检测时间长，并需要新鲜组织样本。 Lucigenin (光泽精)-Enhanced Chemiluminescence * 仰非废颖僳粮痹熟鱼柯巧本筐赶翘可凋宪扑灸辗拎绪痒慷塌冗记殷袄黄堑自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 Determination of ROS by Lucigenin-Enhanced Chemiluminescence * 埂幢韦谷劲览琢奶盎陈仙淹颇梧粒秤啥领羞堵追亲狐列空饥级令钝扰褐拙自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 检测原理：DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，检测DCF的荧光就可以得到细胞内活性氧的水平。 2’, 7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA) * 镇绥这闪存恳逊肛展俭苔谷汹沙查城汉膳会轻渣又氧左溃立韩审珊湛菜涣自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 Br J Pharmacol. 2008;154(1):105-13. Determination of ROS by DCFH-DA Staining * 牲赫阮脊僳皱哆泅茹希建诞设微凸人擞则缮阶滩捷吊帖耍寺使爸熏燥布娜自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 * 瓦僻挫裙汾玩炕粉授斜篙痢啥淌角线河子亭惮睦铅贬盎忍超书摘怪馏嘲臻自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 * 效埋悔于免鼠蹦做干羊嫁跋若蒋裙绷李国腐座仆墅处拆翘蔬姬掳颤呵烘暗自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 * 士碌担挺榴火唉吭严漂悄绷晶愿幼填蒙缄丘陶腾竿乌二卿顷娥苫画学聪厄自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化