肝癌H22石蜡切片的制作总结.doc

石蜡切片法（一） ---------取材、固定、洗涤、脱水 实验原理 材料的选择是制作切片的第一步，用于制片的动物、植物材料应选择新鲜的，用陈腐的材料制片，往往不能反映材料的真实情况。 固定就是将新鲜材料投入某类化学药液中，借助化学药品的作用使细胞组织的形态保存下来不使其改变形态和变质的过程。 材料经过固定液作用以后，内部渗入很多固定液，一定要把渗入里面的固定液洗去，否则留在材料中的固定液有的会妨碍染色，有的会发生沉淀或结晶，影响观察，有的继续作用，使材料变坏等。所以材料中的固定液必须彻底洗净。 材料经过洗涤后含有大量水分，必须用脱水剂脱尽里面的水分，以利于材料的透明和制片的保存，因为水在里面能使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的，只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入。 实验用品 器材 解剖刀，解剖针，解剖剪，镊子，解剖盘，培养皿，吸管。 试剂 福尔马林-酒精-醋酸混合固定液（简称FAA），10％中性福尔马林，秦克（Zenker）氏液，卡诺（Carnoy）氏液，各级酒精（30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％）。 材料 一般动物组织。 实验程序 取材 取材的方法 取材应根据需要，用锋利的刀片从所需部位上切取一小块放在固定液中固定。动物组织的切片，厚度不超过3mm，体积不大于1.5×1.5×0.5cm。材料的选择和切取部位也很重要。 取材的注意事项 取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 切取材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。 切取病理材料时，应特别注意不能将有病的组织损伤，为了和正常无病组织相区别，在取材时除了切取病理材料外，正常的组织也须切取一部分，以便作比较观察。 固定 固定的方法 取到新鲜材料，应按材料的种类、大小、性质和制作要求，立即将材料投入固定液加以固定，使其形态结构和成分被化学试剂固定下来，与生活时保持相仿。 小鼠肝癌组织固定于10％甲醛固定液中。 固定的时间，视材料的种类、大小、性质、固定液的种类与性质、渗透力的强弱等而定，可以从1～2h到十几小时或二十几小时，甚至可以长至几天。一些小的材料，仅须几十分钟。如：兔肝固定于Zenker氏液或Carnoy氏液里，固定时间为12～24h。 固定的注意事项 一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。 有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合。如果混合太早，固定时就没有作用了。 固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20～30倍，有些水分多的材料，中间应更换1～2次新液。 材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外贴上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。 洗涤 材料自固定液中取出后，须立即洗涤，所用的冲洗液应依固定液的性质而定。 固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。若需洗涤则必须用与固定的酒精相近浓度的酒精冲洗。 用含有苦味酸的固定液的材料（苦味酸与福尔马林混合的固定液除外），需要用70％的酒精反复浸洗。 含有铬酸、重铬酸接的，必须用流水冲洗。冲洗时间应与固定时间相同或更长。 用福尔马林固定的，一般可以不冲洗，但长期固定于福尔马林的材料应充分水洗。 含四氧化饿的固定液用水冲洗。 固定液含有氯化汞的，应根据溶剂的性质用水或酒精冲洗。 一般的洗涤方法，将材料放入指管或广口瓶，并加半管水，用纱布将管口扎住，然后倒置于水槽内，这样可以使指管半沉半浮于水中。打开水龙头，让材料按冲洗的时间在流水中冲洗。注意水流不能太急，以免冲坏材料。流水冲洗的时间可根据材料和固定液的情况而定，一般需要12～24h。 脱水 脱水的方法 脱水一般多使用酒精，为了不使材料急剧收缩，应用不同浓度的酒精，自低浓度到高浓度逐级脱水。一般的材料可以从30％的浓度开始，经50％、70％、80％、90％、95％直至纯酒精。在用纯酒精时，需要换2次（使彻底脱水）。对于一些薄嫰、柔弱的材料，可依次经10％、20％、30％……每级相差10％直至纯酒精。 在每级酒精中停留的时间，依照材料的大小、性质以及留在固定液中的时间长短和固定液溶解性而定。一般动物组织如小白鼠的肾脏2～4mm厚，每级停1～2h。 脱水注意事项 脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止吸收空气中的水分。 在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水纸吸尽器皿内剩余液，然后于器皿中加入高一级脱水剂。 在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，负责易使组织变软，助长材料的解体。 在高浓度或纯酒精中，每级