姜黄素抑制大鼠创伤性骨关节炎模型中软骨细胞核因子κBP65核转位的实验总结.doc

姜黄素抑制大鼠创伤性骨关节炎模型中软骨细胞核因子κB P65 核转位的实验研究 王 健，马 捷，顾剑华，王富勇，尚修帅，王兆飞，王 祥，陶海荣(上海交通大学医学院附属第人民医院，上海市201900) 引用本文：王健，马捷，顾华，王富勇，尚修帅，王兆飞，王祥，陶海荣. 姜黄素抑制大鼠创伤性骨关节炎模型中软骨细胞核因子κB P65核转位的实验研究[J].中国组织工程研究，2016，20():2163-2170. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.15.005 ORCID: 0000-0002-4264-8337(王健) 文章快速阅读： 文题释义： 姜黄素：是从姜科、天南星科中的一些植物根茎中提取的一种化学成分，分子式为C21H20O6，为二酮类化合物。 核因子κBp65的核转位：核因子κB是一种在细胞浆中广泛表达的转录因子，p65-p50二聚体是其主要的存在形式。当细胞处于静息状态时核因子κB通过与抑制性蛋白IκBα结合，从而以无活性的形式存在于细胞质中。在多种外界因素刺激下其活性可以被多种因子激活，这些因子产生的第2信使信号导致IκBα的磷酸化和泛素化，继而被降解，核因子κB 脱离了IκBα的阻滞，可转位至细胞核，p65的核转位是核因子κB信号转导通路活化的重要标志。 摘要 背景：骨关节炎软骨细胞的退化是由于一系列的机械因素、炎性递质、生化因素，尤其是基质金属蛋白酶和活性氧等共同作用导致的。姜黄素在体外已被证明是一种有效地活性氧清除剂和活性氮提供剂，但保护关节软骨抑制骨关节炎作用和机制尚不明确。 目的：分析姜黄素防止骨关节炎中软骨损伤的作用机制。 方法：SD大鼠 30 只随机分为假手术组15只和模型组15只。模型组建立大鼠创伤性骨关节炎模型(阳性对照组)，分离软骨细胞进行体外培养，使用姜黄素(姜黄素组)和特异性的核因子κB抑制剂(组)共培养软骨细胞 24 h，Western Blotting和免疫荧光检测核因子κB P65核内外表达情况。RT-qPCR 检测细胞Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶13的表达。 结与结论：Western Blotting检测显示阳性对照组P65主要在细胞核中表达，细胞浆中表达较少；姜黄素组P65主要在细胞浆中表达，细胞核中表达较少。免疫荧光观察阳性对照组核因子κB 均有不同程度的核转位，核转位细胞的核因子κB P65荧光标记主要浓集于核区；阴性对照组、姜黄素组和PDTC组核转位细胞的核因子κB P65荧光标记主要浓集于胞质区。实时荧光定量RT-qPCR检测显示姜黄素组基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶13的表达显著低于阳性对照组，而Ⅱ型胶原的表达显著高于阳性对照组。结果说明，姜黄素能够通过抑制骨关节炎模型中软骨细胞核因子κB信号通路活化，抑制核因子κB P65核转位，抑制软骨细胞释放基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶13的表达，增加Ⅱ型胶原的含量，保护软骨细胞，延缓软骨退变。 关键词： 组织构建；姜黄素；骨关节炎；NF-κB；基质金属蛋白酶；Ⅱ型胶原 主题词： 姜黄素；骨关节炎；NF-κB；基质金属蛋白酶类；Ⅱ型胶原；组织工程 基金资助： 上海市宝山区科学技术发展基金项目(13-E-5)；上海交通大学“医工交叉”合作基金(YG2014MS23) Curcumin inhibits nuclear translocation of nuclear factor-kappa B P65 in a rat model of traumatic osteoarthritis Wang Jian, Ma Jie, Gu Jian-hua, Wang Fu-yong, Shang Xiu-shuai, Wang Zhao-fei, Wang Xiang, Tao Hai-rong (Department of Orthopedics, Shanghai Ninth People’s Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 201900, China) Abstract BACKGROUND: Mechanical, inflammatory, and biochemical factors, particularly matrix metalloproteinases and reactive oxygen lead to chondrocyte degeneration in osteoarthritis. Curcumin has been shown to be