1第一章园艺植物组织培养概述.pptVIP

植物生物技术概述 组织和细胞培养是园艺植物生物技术平台 植物细胞组织培养：是指在无菌（asepsis）和人工控制的环境条件下，利用人工培养基(medium)对离体（in vitro）的器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使其长成完整的植株。 在植物细胞组织培养中，由活体（in vivo）植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等均称为外植体（explant）。 所谓愈伤组织（callus），原本是指植物在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。 在植物细胞组织培养中 ，愈伤组织则指在人工培养基上由外植体 (explant) 形成的一团无序生长的薄壁细胞。 初代培养：是指直接从有机体得到的组织或将其分散成细胞后开始的培养。 继代培养：组织培养中，培养物培养一段时间后，将其接种到新鲜培养基中进行培养。  一个成熟细胞或分化细胞转变成为分生状态的过程，即形成愈伤组织的过程，叫做脱分化（dedifferentiation ) 。 植物的成熟细胞经历了脱分化之后，即形成愈伤组织之后，由愈伤组织能再形成完整的植株，这一过程叫做再分化(redifferentiation)， 或简单地叫做分化(differentiation)或再生(regeneration)。 植物细胞组织培养的全过程 植物细胞经过再分化形成完整植株有两种途径 器官发生（organogenesis） 或不定器官形成 (adventitious organ formation） 体细胞胚胎发生(somatic embryogenesis) 器官发生 植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定芽（adventitious shoots）、不定根（adventitious roots）等器官的过程。 离体培养中器官发生的方式 器官发生过程 不经过愈伤组织的器官发生 经过愈伤组织的器官发生过程 愈伤组织类型 同一种类的植物可以随外植体在植株的不同部位及生长条件的差异而不同。 影响愈伤组织培养的主要因素 外植体 基本培养基：MS，B5及其改良培养基 培养基的使用形式 激素组合 2，4－D诱导愈伤组织最有效的物质。 光照是离体培养中比较复杂的调节因子。 离体培养中光照的控制一般是分阶段进行的。 培养条件下，光照的作用更大程度上是调节细胞的分化状态，而不是合成光合产物。 连续的光照有利于培养细胞维管组织的形成，而一定的昼夜光照周期则有利于极性建立和形态发生。 离体培养条件下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞），统称为体细胞胚或胚状体。 体细胞胚的含义 （1）胚状体是离体培养的产物，属无性胚，仅限于离体培养范畴，区别于无融合生殖胚。 （2）胚状体起源于非合子细胞，可区别于合子胚。 （3）胚状体的形成经历了胚胎发育过程，从球形胚、心形胚、鱼雷胚到成熟胚，完全不同于组织培养的器官发生中芽与根的分化。 体细胞胚的结构与发育特点 具有明显的双极性，根端（胚根）和茎端（胚芽） 体细胞胚形成后与母体的维管组织联系较少，即出现所谓的生理隔离现象。 遗传的稳定性 发生数量大，增殖率高 所谓双极性（double polarity）是指在细胞发育的初期其内含物的分布具不均匀性 ，形成胚性细胞后具有发育成芽端和根端的潜在能力。 所谓生理隔离（physiological isolation）是指体细胞胚与母体组织或外植体的维管束系统无直接联系，胚状体与周围组织间形成缝隙，处于较独立的状态。 体细胞胚的形成 经过愈伤组织的体细胞胚发生 经过愈伤组织的胚胎发生需要三个培养阶段 （1）诱导外植体形成愈伤组织 （2）诱导愈伤组织胚性化 （3）体细胞胚形成 细胞悬浮培养的体细胞胚发生 悬浮细胞系中，培养物中存在两种类型的细胞： （1）自由分散再培养基中的大而高度液泡化的细胞，一般不具备胚胎发生能力 （2）成簇成团的体积小而细胞质致密的细胞，这类细胞具有成胚能力，因而又称为胚性细胞团。 影响体细胞胚胎发生的因素 基因型 植物激素 培养基及培养条件 基因型 不同植物的基因型不同 ，在培养条件下形成体细胞胚的反应各异。自然条件下容易产生无融合生殖胚的植物为多，且培养条件简单如咖啡属植物、芸香科植物等。如园艺植物中柑橘类、胡萝卜及矮牵牛等容易诱导体细胞胚，但植物组织培养的模式植物之一的烟草却难以发生体细胞胚。 同一物种的不同类型、品种发生体细胞胚的难易程度也不同。马铃薯（10％－100％）柑橘类中的甜橙易于胚胎发生， 而宽皮橘较难。 试管苗的驯化 培育壮苗 选择合适的移栽介质 注意移植方式 加强栽后的环境调控