细胞培养复习课题.docVIP

细胞培养技术 1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?试述上皮型细胞的起源及主要形态学特征；成纤维型细胞的起源及主要形态学特征。 【解答】：⑴按生长方式分为二型： 粘附型细胞: 　　附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 　 悬浮型细胞: 　　不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 　（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。） ⑵按照培养细胞的主要形态，可分为以下类型： (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞 ⑶上皮型细胞 来源：来源于外胚层，内胚层细胞（个别例外） 如：皮肤及其衍生物 　　　　　消化道，乳腺，肺泡，上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞 扁平，不规则多角形，中有圆形核 生长特点： 易相连成片； 相靠—紧密相连—成薄层—铺路石状； 生长时呈膜状移动， 很少脱离细胞群而单个活动。 ⑷成纤维型细胞： 来源：由中胚层间充质组织起源的组织 如：真正的成纤维细胞 心肌，平滑肌，成骨细胞， 形态：似体内成纤维细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出2—3个长短不等的突起 中有卵圆形核 生长特点： 排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动； 游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。 2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程 【解答】： ⑴通常，体外培养细胞的全部生命期大致以下三个阶段：①原代培养期也称初代培养，从取出接种培养到第一次传代。此期细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上。细胞群细胞相互依存性强在软琼脂培养基细胞形成率很低②．传代期 全生命期中持续时间最长代培养细胞经传代后称做细胞系（ell line）。一般情况下传代1050次左右，细胞，，细胞进入③衰退期增殖很慢或不增殖最后衰退亡。永生性（mmortality）或恶性（alignancy）细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系（nfinite cell line），连续细胞系（ontinuous cell line）。⑵每代贴附生长细胞的生长过程： ①游离期： 细胞接种后在培养液中呈悬浮状态，也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。 时间：10分钟一4小时 ②贴壁期： 　细胞附着于底物上，游离期结束。 　底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等 ③潜伏期 　此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。 细胞株潜伏期一般为6～24小时。 ④对数生长期： 　细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。 ⑤停止期（平台期）： 　细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度限制 3.简述体外培养细胞对生存环境的基本要求. 【解答】： ⑴细胞的营养需要： 　①基本营养物质： 　　　氨基酸（１２种＋谷氨酰胺） 　　　维生素 　　　葡萄糖、核糖、脱氧核糖等　　　 　　　无机离子等 　②促细胞生长因子：多由血清提供 ⑵细胞的生存环境： ①温度条件对细胞生长的影响： 不同生物来源的组织细胞培养温度不同；体外培养动物细胞最常用的温度是37℃。 耐低温不耐高温！ 　在生理温度范围内，温度与细胞生长率之间存在正相关关系。（复习：温度对酶促反应的影响） ②气相环境对细胞生长的影响： 动物细胞培养的气相环境都是采用5%CO2与95%空气（提供氧）的混合气体。 　Ｏ2参与细胞的能量代谢过程。 　ＣＯ2用于维持培养液的酸碱度。 　一般多为开放式培养 ③培养液的酸碱度对细胞生长的影响： 大多数的有机体细胞能在pH6.0～8.0的环境中生存。最适宜的pH值范围是7.2～7.4。 体外培养的正常细胞耐酸能力要强于耐碱能力 ④无污染、无毒（前提条件！） 4．什么是细胞培养用液,主要分为哪几类? 【解答】： ⑴培养用液是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。 ⑵主要包括：　平衡盐溶液 ； 培养基； 其他培养用液 。 5．D-Hank’s与Hank’s的主要区别是什么? 【解答】： D-Hank’s不含有Ca2+、Mg2+ ，常用于配制胰酶溶液。 6．简述胰酶的常用浓度及配制时的注意事项。 【解答】：胰酶(trypsin)溶液： 浓度一般为0.1％～0.25％ 配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液 。 7.细胞培养中血清的主要作用？ 【解答】：(1)提供基本营养物质 ；