实验二 碱裂解法抽提质粒DNA-2.pptVIP

实验一、碱裂解法抽提质粒DNA 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。 质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。 质粒的提取方法很多，大多包括 3 个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒 DNA 的分离和纯化。 本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。 1、掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用； 2、掌握常用分子生物学试剂的配制； 3、掌握无菌操作技术； 4、掌握大肠杆菌的培养、保存及液体培养物OD值测定的方法； 5、掌握移液器、分光光度计、离心机的正确使用方法； 6、学会根据实验需要选择合适的大肠杆菌菌株和质粒载体。 一、实验目的 在 pH 12.0～12.6 碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体 DNA 变性分开，而共价闭环的质粒 DNA 虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。 将 pH 调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体 DNA 、大分子量的 RNA 和蛋白质在去污剂 SDS 的作用下形成沉淀，而质粒 DNA 仍然为可溶状态。 通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体 DNA 、 RNA 及蛋白质，质粒 DNA 尚在上清中，然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒 DNA 。 二、实验原理 1、 含有pBluescript II SK (+)(pSK)质粒载体的大肠杆菌菌株DH5α菌液 2、含有重组质粒 M