酶联免疫吸附试验ELISA手工操作注意事项.pptVIP

影响酶联免疫测定的因素较多, 诸如标本的采集保存、试剂的准备、加样的技术、孵育温度的控制、洗涤反应板的方式、显色反应时间的控制等一系列问题均有可能对试验结果产生很大的影响, 只有避免了这些因素, 才能保证试验结果的准确性和可靠性。 一、移液枪的使用 2. 体积设定 大体积 ? 小体积 逆时针 精度最佳 小体积 ? 大体积 顺时针 调至超过设定刻度，再回调可保证最佳的精确度 二、ELISA具体操作 1 标本的收集和保存 2 试剂的准备 3 加样本及反应试剂 4 温育 5 洗板 6 显色 7 比色 8 结果判断 1 标本的收集和保存 未抗凝血标本离心前一般令其自行凝集，不可用木棍等剥离凝血块。通常于室温（20－25℃）放置30－60min，血标本可自发完全凝集，析出血清；或37℃水浴20－30min，析出血清。 以3000r/min转速离心5－10min，使血清分离完全。 若过早离心，分离不全，血清中会残留部分纤维蛋白原，吸附于反应微孔，并且不易洗去，可与酶标记物非特异性结合，造成假阳性。 1 标本的收集和保存 （1）要注意避免出现严重溶血、脂血标本。 血红蛋白中铁卟啉具有类似过氧化物酶的活性，因此，在以辣根过氧化物酶（HRP）为标记酶的ELISA测定中，如标本溶血，血清中血红蛋白浓度较高，则其很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的底物反应，从而产生非特