中药化学成分的系统预试验.doc

中药化学成分的系统预试验 中药中所含的化学成分比较复杂，在研究某中药的化学成分之前，一般应先进行预试验，初步了解其中可能含有哪些类型的成份，以便对提取、分离工作提供有益的参考，预试验一般可分为两大类：一类是单项预试验，即可根据需要，重点检查某类化学成分的存在与否；另一类是系统预试验，即选用定性试验及薄层层析等方法，对中药中各类化学成分进行比较全面的检查，然后进行综合分析，初步判断有或无那些成分存在。 预试验的结果一般只能作为参考，这是由于有些定性试验不是某类化学成分的特效、专一反应，同时在进行试验时，几种化学成分之间会发生相互干扰，使反应结果呈假阳性，故常须对某些类型化学成分进一步做层析法（TLC或 PC）检查，才能进一步作出较恰当的判断。 一、实验目的 1、 学习中药化学成分的系统预试验原理及方法。 2、 掌握中药化学成分的系统预试验程序及结果判断。 二、实验原理 根据中药中所含各类化学成分在不同极性的溶剂中溶解度不同。先选用不同极性的溶剂把溶解度相近的成分提取出来，分成极性不同的几个部分，即供试液；然后再选用各类成分的定性反应（包括沉淀反应和显色反应等）及层析法（TLC、PC等）检查，最后进行分析判断，初步确定有无哪几类化学成分。 三、实验内容 （一）预试验溶液的制备 1、水提取液 (1) 冷水浸液：称取样品粗粉 5g，置于 l00ml的三角烧瓶中，加蒸馏水 50-60ml室温浸泡过夜。过滤出约 20ml滤液供检查氨基酸、多肽、蛋白质用。 (2) 热水提取液：将上述剩余的冷水浸泡液连同滤渣于水浴上 60℃左右热浸半小时，趁热过滤，滤液供检查糖、多糖、有机酸、皂甙、甙类、酚类、鞣质等成分用。 2、乙醇提取液 另称取样品粗粉 10g，置于 250ml圆底烧瓶中，加 95%乙醇 100ml，于水浴上加热回流一小时，稍冷后加入蒸馏水使其含醇量为 70%，冷至室温，过滤，滤液转移至分液漏斗中；用 100ml 石油醚（60-90℃）分两次萃取，每次用石油醚 50m1，以除去叶绿素等，分出下层乙醇提取液，浓缩至 40-50ml，加 95%乙醇 50ml溶解后过滤，滤液供检查黄酮、蒽醌、香豆素、萜类、甾体化合物、内酯化合物、强心甙、有机酸、酚类、鞣质等成分用。 3、酸性乙醇提取液 称取样品粗粉 2g，加 0.5%硫酸的乙酸溶液 10ml，于水浴上加热回流 10分钟，过滤，滤液供检查生物碱用。 4、 石油醚提取液 称取样品粗粉 1g，加入石油醚（60-90℃）10ml，滤液供检查挥发油、油脂、萜类、甾体化合物等成分用。 （二）各类成分的检查 1、检查生物碱类 取上述酸性乙醇提取液先用稀氨水调至中性，再于水浴上蒸干，残渣加 5%硫酸 5ml溶解后，过滤，滤液供以下实验用。 (1) 碘化铋钾试验：取滤液 1ml，加入碘化铋钾试剂 1-2滴，如有桔红色沉淀产生，即表示可能有生物碱。 (2) 碘化汞钾试验：取滤液 1ml，加入碘化汞钾试剂 1-2滴，如有浅黄色或白色沉淀产生，即表示可能有生物碱。 (3) 硅钨酸试验：取滤液 1ml，加入硅钨酸试剂 1-2滴，如有浅黄色或灰白色沉淀产生，即表示可能有生物碱。 2、检查氨基酸、多肽和蛋白质类 (1) 加热沉淀试验：取冷水浸液 1ml，加热煮沸，如产生浑浊或沉淀，即表示可能有蛋白质。 (2) 双缩脲试验：取冷水浸液 1ml，加入 10%氢氧化钠水溶液 2滴，摇匀，再滴加 0.5%硫酸铜水溶液 1-2滴，摇匀，如显红色，红紫色或紫色，即表示可能有多肽、蛋白质。 (3) 茚三酮试验：取冷水浸液 1m1，加入 0.2%茚三酮乙醇溶液 2-3滴，摇匀，于沸水浴中加热 5 分钟，冷却后，如显蓝色或蓝紫色，即表示可能有氨基酸、多肽和蛋白质。 (4) 吲哚醌试验：取冷水浸液滴于滤纸片上，干燥后，喷洒吲哚醌试剂，于 120℃加热 5分钟，若斑点显各种颜色，即表示可能有氨基酸。 3、检查还原糖、多糖和甙类 (1) 斐林反应：取热水提取液 1ml，加入新配制的斐林(Fehling)试剂 4-5滴，在沸水浴上加热 5分钟，如产生砖红色沉淀，即表示有还原糖或其它还原性物质。若现象不明显，可另取热水提取液 4ml，加入 10%盐酸 1ml于水浴上加热 10分钟使其水解，冷却后，若有沉淀应过滤，然后加入 5%氢氧化钠水溶液调至中性，再加入斐林试剂 1ml于沸水浴上加热 5分钟，如产生砖红色洗淀，即表示可能有多糖或甙类。 (2) α-萘酚试验：取热水提取液 1ml，加入 5% α-萘酚乙醇液 2-3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入浓硫酸 lml，在试液与硫酸的交界面产生紫色或紫红色环，即表示有糖类，多糖或甙类。 (3) 多糖的试验：取热水提取液 5ml，于水浴上蒸发至 1ml，再加入 95%乙