《蛋白质组学对于肝病研究的作用》.doc

蛋白质组学肝病研究 蛋白质组学已被广泛应用于疾病相关研究. 综述了最近几年来蛋白质组学在肝脏疾病研究中特别是肝脏肿瘤肝硬化毒/药物肝损伤等方面的进展, 其研究结果将对生物标记物和药靶的寻找, 以及致病机理的阐述具有重要意义. 关键词 蛋白质组学 肝脏疾病 随着人类基因组计划(HGP)的实施及人类基因组工作草图的完成, 生命科学研究在21 世纪初进入了功能基因组研究时代. 蛋白质组学研究在这一前沿领域中具有举足轻重的战略地位, 已被应用于生命科学的许多领域, 如肿瘤的发生与发展、细胞分化与胚胎发育基因调控机制 重大疾病的发生与治疗、药学研究和环境与健康的关系等. 蛋白质是理解细胞功能和疾病过程的核心, 没有在蛋白质组学方面的积极努力, 就不能获得基因组学的成果 蛋白质组学概念及研究特点 蛋白质组学是一门以全面的蛋白质性质研究(如表达水平转录后修饰细胞内定位相互作用等) 为基础, 在蛋白质整体水平对疾病机理细胞模式功能联系等方面进行探索的科学. 与基因组研究相比, 蛋白质组研究存在明显的不同, 主要有以下几点: 基因组研究是对相对稳定的DNA 的静态研究, 而蛋白质组研究则是对细胞不同时期蛋白质表达的动态研究; 蛋白质更能反映细胞的功能, 磷酸化乙酰化糖基化甲基化和亚硝酰化等翻译后修饰和剪切的存在, 使得蛋白质组研究的信息量要多于基因组;基因组可通过PCR 扩增, 而蛋白质分析较困难, 特别是对动态表达的追踪和低丰度蛋白的分离鉴定, 因而, 蛋白质组学研究又在很大程度上依赖于相关技术的发展, 目前, 在双向电泳的基础上, 国际上又出现了以色谱/电泳-质谱为主要技术平台的生物大分子大规模分离和鉴定的技术与方法. （/news/policy/ 科研规划） 2 蛋白质组学在肝病研究中的应用 由于蛋白质组学研究更接近生命现象的本质, 并在药靶研究中具有潜在价值, 所以已被广泛用于疾病相关研究. 在肝脏研究领域, 蛋白质组学可用来研究肝脏的生理与病理肝脏发育及肝脏疾病等, 主要肝脏疾病包括肝脏肿瘤肝硬化毒/药物肝损伤及其他. 2.1 肝细胞癌 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC) 是最主要的肝脏肿瘤, 约占原发性肝癌的90%以上, 早期诊断困难, 病程发展快, 5 年生存率小于5%. HCC 在肝硬化病人中有较高的发生率, HBV 和HCV 慢性感染亦是其发病的高危因素. 因此, 寻找有效的肿瘤标志物用于高危人群的筛查疾病的早期诊断药物靶标的设计及癌变机理研究成为HCC 研究的当务之急. 肿瘤标志物是存在于人体组织或体液中能被定量测量并对恶性肿瘤患者有临床意义的生物分子, 人们已在细胞组织样品和血清水平开展了这方面的蛋白质组学研究. （/zt/disease/疾病研究） 1. (1) 细胞水平: Seow 等人对人肝细胞癌细胞系HCC-M 作了全谱分析, 对408 个点进行MALDI-TOF-MS 分析, 有301 个点得到了较好的质谱图, 经数据库检索鉴定出了属于192 个基因的272 种蛋白质. 这些蛋白质中除了一些看家基因外, 还出现了可能与肿瘤发生过程相关的蛋白, 如14-3-3 蛋白膜联蛋白抑制素和硫氧还蛋白过氧化物酶. 对其余29 种未鉴定的蛋白进行nESI MS/MS (nano- electrospray ionization MS/MS) 和de novo 测序, 全部得到鉴定, 其中包含已报道的肿瘤相关蛋白磷酸酪氨酸磷酸酶激活因子RNA 结合蛋白调节亚单位复制蛋白A 32 kD 亚单位和唾液酸磷酸合成酶. 还发现一种新的核蛋白HCC-1, 其cDNA 水平在胰腺癌中上调, 在高分化肝细胞癌中也上调, 而在肿瘤细胞转入低分化状态时下调. 寻找HCC-1 相互作用蛋白RNA/DNA 的工作正在进行. 在以上工作的基础上, Liang 等人建立了肝癌细胞系HCC-M 的蛋白质双向电泳数据库 ), 此外, 还将搜集其他肝癌细胞系 2. 正常肝组织和肿瘤组织的蛋白表达信息, 以确定早期诊断的标记物和肿瘤特异性治疗靶标. Yu 等人对比了人肝癌细胞系BEL-7404 和正常人肝细胞系L-02 的双向电泳结果, 在99 个差异点中鉴定出12 个蛋白点, 还将反义EGFR 的cDNA 序列转染肝癌细胞, 发现肿瘤细胞生长受抑, 与对照相比有40 个蛋白表达变化, 其中3 个蛋白有向正常细胞表达水平变化的趋势. (2) 组织样本: Wu 等人运用双向电泳技术对3 例正常肝组织和8 例HCC 肝组织的核基质蛋白进行对比分析, 鉴定出4 个HCC 特异蛋白, 认为这些核基质蛋白的发现可能为HCC 的发生发展发病机理研究提供新途径. Yoon 等人运用双向电泳技术对11 例