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珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 谢 谢！ 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 赛乐迪亚（Serodia）TPPA 梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 明胶凝集试验(PA)与ELISA的原理比较 PA ELISA 显色 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 明胶凝集试验(PA)与ELISA操作步骤的比较 ELISA PA 加入样品和稀释液 第一步反应 洗涤 洗涤 第二步：酶反应 显色 第三步： 加入底物 结果判读 孵 育 凝集图像 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 反应温度对ELISA及PA的影响 PA 10 20 30 反应温度（℃） 反应速率 ELISA 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 样品对ELISA及PA检测结果的影响 X：假阳性 O 加热灭活 X：与底物有关 O 溶血 O 黄疸 O 脂血 O O 血浆 O O 血清 ELISA PA 样品类型 O：无影响 ：部分有影响 X ：有影响 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 明胶颗粒的制备 明 胶 阿拉伯胶 醋 酸 染料/色素 偏 磷 酸 乙 醇 水 Φ 3.0μm 表面电荷 -0.760 ~ -0.830 明胶颗粒（电镜照片） 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 明胶颗粒的致敏 5%明胶颗粒/0.15M PBS（pH7.2） 5ppm 丹宁酸/0.15M PBS（pH7.2） 孵育（37℃，15min） 生理盐水洗涤（2000rpm，5min） 活化的明胶颗粒/0.15M PBS（pH5～9） 抗原 孵育（37℃，60min） 生理盐水洗涤（2000rpm，5min） 5%致敏明胶颗粒/悬浮液* 冷冻干燥 * 0.15M PBS（加入正常兔血清、明胶、阿拉伯胶等） 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory Serodia TPPA的操作步骤 6、结果判读 1、加入样品稀释液 100μl 25μl 25μl 25μl 孔号 1 4 3 2 1 2、加入测试样品 25μl 孔号 1 4 3 2 1 致敏颗粒 4、加入明胶颗粒 最终稀释倍数 孔号 1 4 3 2 1 1:40 1:80 25μl 25μl 未致敏颗粒 5、混匀，加盖，孵育2个小时 3、样品的倍比稀释 孔号 1 4 3 2 1 最终稀释倍数 1:20 1:40 25μl 25μl 25μl 25μl 弃去 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory TPPA操作中的注意事项 不要将生产批号不同的试剂混合在一起使用 试剂应2-8 ℃保存，不可冻结试剂 试剂在使用前应事先从冰箱中取出, 平衡至室温后再进行操作 试验应在FASTEC硬质微量反应U型板中进行, 该板洗涤后可重复使用, 但重复使用次数不宜超过三次 最好将反应板放置在一块白色湿布上进行加样、稀释过程，以防止静电可能带来的影响 致敏粒子和未致敏粒子在滴加前应充分摇匀。加样、稀释完毕后应轻轻拍打反应板边缘以进行混匀，注意勿使液体溅入邻近的孔中，不要使用旋涡混匀器 反应应在室温下静置2小时以上，不要使用水浴箱或恒温箱，结果观察完毕前不要振摇反应板 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory Serodia TPPA的结果判读（定性试验） 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory Serodia TPPA的结果判读（定量试验） 珠海丽珠试剂有限公司 Livzon (Group) Reagent Factory 反应温度的影响 抗体效价 5 12 15 25 30 37 1：2560 1：1280 1:640 1：160 1:80 1:80 样品3 样品2 样品