第九讲基因操作的工具酶详解.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 用蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶I后 ①小片段： 5’ 3’ DNA外切酶活性 ②大片段： 5’ 3’ DNA聚合酶活性 3’ 5’ DNA外切酶活性 大片段称为Klenow大片段酶 2.Klenow片段 四. DNA聚合酶 * E.coliDNA聚合酶I和Klenow片段 5’到3‘DNA聚合酶活性 3’到5’ DNA外切酶活性 5’到3’ DNA外切酶活性 5’到3’ DNA外切酶活性 蛋白酶处理 DNA聚合酶I全酶 Klenow片段酶 四. DNA聚合酶 * 用途 Klenow片段广泛用于各种克隆实验 补齐双链DNA的3’末端；如补平经限制酶消化的DNA所形成的3’凹端 双链DNA3’末端的标记；标记DNA片段的末端等 在cDNA合成中，第二链的合成 DNA序列分析 3’-端的末端标记 随机引物标记核酸探针 四. DNA聚合酶 * 3.T4 DNA聚合酶 来源：从T4噬菌体感染的E.coli中分离得到 具5’ 3’聚合酶活性和3’ 5’外切酶活性 四. DNA聚合酶 * Taq DNA聚合酶是从栖热水生菌(Thermus aquaticus)中分离纯化的依赖DNA的DNA