植物基因克实验指导讲义.docVIP

植物基因克隆实验指导 目 录 植物基因克隆实验规则 2 实验一：试剂的配制 6 实验二：植物总DNA的快速少量提取和浓度检测 8 实验三：微卫星简单重复序列锚定PCR扩增技术（SSR-PCR） 12 实验四：PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 14 实验五：SSR标记聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 23 实验六：琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物, 将该实验设计为综合性实验课程，实验内容设计上完全抛弃了原来分散的、孤立的单纯学习某一实验技术的缺陷, 将单个实验综合为系统的、连贯的系列型大实验，注重科研成果在教学中的应用，我们从以往的科研项目中选取了部分研究内容用于学生的综合性实验教学，这是基于教学实验与实际科学研究实验之间的新的实验教学模式。 整套实验围绕水稻根系发育突变体的基因克隆这一研究课题进行操作, 设计的实验内容具有极强的连续性和综合性，让学生在独立实践操作中学习基因克隆的基本研究方法和体会科学研究的严密逻辑和培养科研理念。 我们将实验内容设置为8个部分, 实验内容前后衔接紧密, 环环相扣, 不可分割, 前一个实验的结果是下一个实验的材料。该课程使学生获得了整个类似科研实践过程的训练和体验, 学习了从事科研工作的基本功, 对完成自己的毕业论文及将来从事生命科学研究奠定了科研基础。 二、实验的进行程序和要求 1、预习 学生在课前应认真预习实验指导以及教材有关章节，必须对该次实验的目的要求、实验内容、基本原理和操作方法有一定的了解。 2、讲解 教师对该实验内容的安排及注意事项进行讲解，让学生有充分的时间按实验指导的要求进行独立操作与观察。 3、独立操作与观察 除个别实验分组进行外，一般由学生个人独立进行操作和观察。在实验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。有关基本技能的训练，要按操作程序反复练习，以达到一定的熟练程度。 4、演示 每次的实验都备有演示内容，其目的是帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在实验课有限时间内获得更多感性知识的机会。 5、作业 实验报告参照本科毕业论文的格式写，必须强调科学性，实事求是地记录、分析、综合。在实验结束时呈交。 6、小结 每次实验结束后，由师生共同小结本次实验的主要收获及今后应注意的问题。 三、实验规则和注意事项 1、每次上课前，必须认真阅读实验指导，明确本次实验的目的要求、实验原理和注意事项，熟悉实验内容、方法和步骤。 2、上实验课时必须携带实验指导、记录本及文具等。进入实验室要按规定座位入座。 3、实验时要遵守纪律，听从教师指导，保持肃静。有问题时举手提问，严禁彼此谈笑喧或随意走动，也不得私自进行其他活动。 4、实验时要遵守实验操作规程，严格按照教师的安排和实验指导的要求进行。操作观察要认真仔细，边做、边看、边想，认真做好实验记录。 5、要爱护仪器和器材设备，注意节约实验材料、药品和水电。如有损坏器材应立即报告并主动登记、说明情况。 6、实验结束后，应清理实验台面，认真清理好仪器、药品及其他用品，放回原处，放好凳子，方可离开实验室。值日生要负责清扫地面，收拾实验用品，处理垃圾，关好水、电、门窗后再离开。 实验一 试剂的配制 一【实验目的】 掌握TPS抽提液、TAE和TBE电泳缓冲液等试剂的配制方法。 二【试剂】 Tris（三羟甲基氨基甲烷）、浓HCl、乙二胺四乙酸二钠、NaOH、KCl、四硼酸钠三【仪器设备】 天平、PH计四【试剂配方】1M Tris-HCl?(pH8.0)：配制量 1L ????配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 ?????????????????????????2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。?????????????????????????3. 加入约42mL浓盐酸调节所需要的pH值。??????????????????????? 4. 将溶解定容至1L。??????????????????????? ?5. 高温高压灭菌后，室温保存。???????????????????????????注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。?0.5M EDTA?(pH8.0)?：配制量 1L ?????配置方法 1. 称取186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H2O），置于1L烧杯中。 ?????????????????????????2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。 ?????????????????????????3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。???????????????????????