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厌氧菌的检验 华中科技大学同济医学院 附属协和医院检验科 曾 吉 概述 厌氧菌（anaerobic bacteria)是指一大群必须在无氧的条件下才能生长的细菌。 厌氧菌在人体内的很多部位都存在，包括口腔、肠道，上呼吸道、女性阴道等。 在维持人的正常生理代谢提供了重要保证。 厌氧菌感染的条件 1.组织缺氧或氧化还原电势降低，如局部组织供血障碍、大面积外伤或刺伤等； 2. 机体免疫功能下降，如长期使用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等。 厌氧菌感染的临床及细菌学指征 凡有下列情况者应怀疑有厌氧菌感染： 1．感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音， 是产气荚膜梭菌所引起感染的特征。 2．发生在粘膜附近的感染，口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等粘膜，均有大量厌氧菌寄生，这些部分及其附近有破损，极易发生厌氧菌感染。 3．深部外伤如枪伤后，人被动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。 4．分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。发红色荧光的分泌物，可能有产黑色素普鲁沃菌和不解糖紫单胞菌；分泌物或脓汁中有硫磺颗粒，为放线菌感染。 5．分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌， 而常规培养阴性者； 或在液体及半固体培养基深部长的细菌，均可能为厌氧菌感染。 6．长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效的病例，可能是厌氧菌感染。 7．最近有流产史者，以及胃肠手术后发生的感染。 厌氧菌的检验 一、标本的采集与运送 1.适合做厌氧培养的标本：无菌体液、深部脓肿、深部组织或穿刺液； 2.不适合做厌氧培养的标本：鼻咽拭子、痰和气管抽取物、肛拭或肠道内容物、皮肤或粘膜表面的分泌物、排出的尿或导尿、阴道或子宫拭子、前列腺分泌物等。 标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功至关重要。在采集和运送时应注意： 标本不能被正常菌群所污染； 应尽量避免接触空气； 尽快送到实验室。 临床可行的操作方法： 1. 床旁接种； 2. 转运拭子； （有商品化的，也可自制：如刃天青甘油肉汤） 二、标本的检验 直接镜检： 分离培养：常用的培养基有强化血琼脂平板、卡那－万古霉素冻溶血琼脂平板、七叶苷胆汁平板等 鉴定：主要根据菌落性状、染色情况、耐氧试验、生化反应等来鉴定 直接镜检 1.将临床标本直接涂片,革兰染色。 可以提供临床医生有关感染的性质，可以给临床医生预处理提供帮助； 可以帮助选择合适的培养基。 分离培养方法 厌氧菌的培养方法： 厌氧罐：可用于大量标本的操作，操作较简便，实验设备要求不高。 厌氧手套箱培养法：厌氧条件好，操作复杂，设备要求较高，一般实验室不太适用。 厌氧产气袋法：操作简便，不需要特殊实验条件，适合临床常规操作。但应注意厌氧产气袋产热导致细菌死亡，造成假阴性的产生。 培养及鉴定 1.培养：标本应迅速接种，然后放厌氧环境，一般培养48小时;特殊的可以延长。 2.鉴定：首先做耐氧试验，耐氧试验阳性的做革兰染色等染色方法，再做生化鉴定。 耐氧试验 厌氧菌的分类 主要分为以下几个类型 厌氧革兰阳性球菌 厌氧革兰阴性球菌 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 革兰阳性无芽胞厌氧杆菌 梭状芽胞杆菌属 厌氧球菌 在临床是有重要意义的主要有： 消化球菌 消化链球菌 韦荣球菌 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 类杆菌：是临床上分离最多的厌氧菌 梭状芽胞杆菌属 为一大群厌氧或微需氧的粗大芽胞杆菌，革兰阳性，均具有芽胞，故名。临床上有致病性的主要有以下几种： 破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌 破伤风梭菌 可引起破伤风，故名。 形态特征：本菌细长，革兰阳性，动力阳性，芽胞正圆形，比菌体大，位于菌体顶端，使菌体呈“鼓槌状”，为该菌的特征。 微生物检验：根据临床表现可作出诊断，一般不作细菌学检查，若临床需要可按下列方法进行。 1、直接涂片 2、厌氧培养　 3、毒力试验 4、鉴定 产气荚膜梭菌 是引起气性坏疽的主要病原菌，或产生外毒素和多种侵袭性酶类。 形态特征： 革兰阳性粗短大杆菌，两端纯圆，呈单或双排列，芽胞体于菌体中央或次极端，不大于菌体，镜下不易观察到。动力阴性。 培养特性：不严格厌氧，在血平板上，多数菌株呈双层溶血环，内环为β 溶血，外环为不完全溶血。 在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量的气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势汹涌，称为“汹涌发酵”，为本菌的特征。　 肉毒梭菌 肉毒梭菌主要引起食物中毒，偶有感染人的报道。该菌产生一种毒性极强的外毒素－－肉毒毒素。 形态特征：肉毒梭菌为革兰阳性粗短杆菌同，单、双排列。芽胞位于次极端形成椭圆形芽胞，芽胞大于菌体，使细菌呈汤匙状或网球拍状。 艰难梭菌 艰难梭菌是严格厌氧菌，对氧十分敏感，不易培养。在肠道寄生，为肠道正