噬菌体展示技术及其应用幻灯片.ppt

* 噬菌体展示技术及其应用 高 建 明 噬菌体是细菌病毒, 在与宿主细胞特异性受体结合并注入其DNA 后, 能将其DNA 整合进宿主基因组(溶原性) , 或用于合成新的噬菌体颗粒。在真核宿主中, 噬菌体不能复制, 如无合适的原核宿主, 噬菌体如同无生命的颗粒性抗原。 噬菌体可以是单股DNA (如M 13、fd 和f1)、双股DNA (如λ 噬菌体)、双股RNA (如f6) 或单股RNA (如M S2 和Q B)。噬菌体在自然环境中普遍存在, 数量和种类远多于细菌。 噬菌体展示技术（Phage Display techniques，PDT）起源于1985年,是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术，广泛应用于蛋白组学、基因克隆等多个分子生物学领域。 目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速，在抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离和人工抗体和疫苗的制备、诊断技术、酶抑制剂的研究开发、多肽药物的研制等生物技术研究的不同领域得到了应用，并对这些领域产生了深远的影响。 噬菌体展示的基本原理 在噬菌体衣壳蛋白基因中插入外源基因，形成融合蛋白表达在噬菌体颗粒蛋白的表面，被展示的多肽或蛋白质可保持相对独立的空间结构和生物学活性。 利用靶分子，采用适当的淘洗方法（亲和→洗脱→扩增→亲和的循环步骤），洗去非特异结合的噬菌体，最终从噬菌体文库中筛选出能结合靶分子的目的噬菌体；外源多肽或蛋白质表达在噬菌体的表面，而其编码基因作为病毒基因组中的一部分可通过噬菌体DNA 序列测序出来，使得表达蛋白（表现型）和编码基因（基因型）之间完美地结合起来，为生物科学提供高效而实用的研究手段。 Smith GP. Filamentous fusion phage : novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface . Science ,1985 ,228 :1315 - 1317. 1985年Smith首次通过基因工程的手段,将外源基因插入丝状噬菌体基因组中,从而使表达的外源肽或蛋白与噬菌体外壳蛋白一起展示在噬菌体表面,由此建立了噬菌体展示技术。 1990年Scott等首次将随机序列肽与丝状噬菌体表面蛋白g 融合展示在噬菌体表面,建立了噬菌体展示随机肽库。 Scott J K, Smit h GP. Searching for peptide ligands wit h an epitope library. Science , 1990 ,249 :386. The applied use of bacteriophages phage therapy (use as anti-bacterial agents) phage display phage-delivered vaccine delivery vehicles for gene therapy typing of bacteria Example of a successful phage therapy treatment. Lytic phages specifically kill pathogenic bacteria as an alternative to antibiotics 接受过噬菌体治疗的病人对细菌和病毒感染的抵抗力增强, 噬菌体能上调感染病人的免疫应答。噬菌体治疗能改变血清α肿瘤坏死因子(TNF-α) 水平, 体外加入噬菌体能提高血细胞培养物中的TNF-α和白细胞介素6水平。IL-6 涉及Th2 型应答, 对诱导B细胞分化成抗体形成细胞特别重要。总之, 这些结果表明噬菌体能作为细胞和体液免疫的天然佐剂。 In phage display, a heterologous peptide or protein is displayed on the surface of the phage through transcriptional fusion with a coat-protein gene ,producing novel phage particles that have a variety of potential uses. Foreign proteins can usually be displayed on more than one phage coat protein and in varying amounts. Generally, the smaller the foreign protein or