培养控制幻灯片.ppt

2011年8月菌苗培训  ——王强 培养过程的控制 　 工业生产上笼统地把一切依靠微生物的生命活动而实现的工业生产均称为“发酵”。 主要的控制 1、污染 2、pH值 3、温度 4、溶解氧浓度及空气流量 5、泡沫 6、补料 7、革兰氏染色 第一节 污染 的 控制一、杂菌污染的途径及防治 （1）空气系统 ①提高进入过滤器空气的洁净度及温度，降低空气的湿度、含油量 ②装填过滤介质（棉花、过滤板）时要压紧、平整、均一 ③保持过滤介质的干燥状态 ④防止空气过滤器的渗漏 ⑤稳定压缩空气的压力 ⑥总过滤器定期更换棉花，灭菌 ⑦当突然停电或空压机故障时，保持空气系统正压状态 （2）设备 ①发酵罐加强清洗、定期除垢 ②定期对压力表、温度计校正 ③对发酵罐、空气系统进行彻底的捡漏维修 ④与空气、下水道连接的阀门保证严密度 ⑤严格按照操作规范进行发酵罐以及空气系统灭菌 （3）培养基 ①配制培养基防止结块，使热量难以渗透进去杀死其中潜伏的微生物 ②进料口应有过滤措施，以防块状物及异物进入罐内 ③保证进气及排气畅通，控制好温度、压力以及时间 ④培养基降温过程中严防泡沫顶罐 （4）种子及接种 ①培养基及器具彻底灭菌后干燥 ②避免菌种移接过程（万级局部百级）中污染 ③避免菌种在培养或保藏过程中受到污染 ④检验用培养基及镜检鉴定为纯粹后用于生产 ⑤接种前手部消毒，以及保证接种器具及补液无菌 第二节 pH 值 的 控制 一、pH对菌体生长和代谢产物合成的影响： ①PH影响酶的活性： 当pH值抑制菌体中酶的活性时，会阻碍菌体的新陈代谢 如猪丹毒最适pH为7.2-7.6 猪霍乱沙门氏菌最适pH为6.8-7.8 猪多杀性巴氏杆菌最适pH为7.2-7.4 猪链球菌最适pH为7.4-7.6 ②PH影响细胞膜的电荷状态： 引起膜的渗透性发生改变 ，从而影响菌体对营养物质的吸收和代谢产物的分泌，因此影响新陈代谢的进行 ③PH影响培养基营养物质和中间代谢物的分解，从而影响细菌对这些物质的利用 二、影响pH值变化的因素 1、营养物质代谢 （1）蛋白质代谢 水解蛋白胨而生成铵离子，使pH上升，是补料的标志之一 （2）氮代谢 当氨基酸中的-NH2被利用后pH会下降 2、代谢产物形成 某些代谢产物本身呈酸性或碱性，使菌液pH变化。 3、消泡油添加过量 脂肪的分解利用，可造成有机酸积累，使培养液pH下降。 三、pH值的控制 1、调节好培养基进罐前的pH 。 2、在培养基中加入维持pH的物质，如碳酸钙，或具有缓冲能力的试剂，如磷酸缓冲液等。 3、适量的消泡剂 脂肪 4、通过补料调节pH ①40%葡萄糖溶液 ②氨水 第三节 温 度 控 制 一、影响发酵温度变化的因素 伴随发酵的进行而产生的热量叫发酵热 Q发酵 = Q生物 + Q搅拌 - Q蒸发 - Q辐射 1、生物热 微生物在生长繁殖过程中，本身产生的热 微生物进行有氧呼吸产生的热比厌氧发酵产生的热多。 2、搅拌热 通气、搅拌下液体与设备之间的摩擦而产生的热 3、蒸发热 空气进入发酵罐后，就和菌液广泛接触进行热交换。同时必然会引起水分的蒸发，所需的热量即为蒸发热。 4、辐射热 由于发酵罐内外温度差，通过罐体向外辐射的热量。 冬天大一些，夏天小一些，一般不超过发酵热的5％。 二、温度对微生物生长的影响 影响酶的活性，进而影响代谢速率 随着温度的升高，气体在溶液中的溶解度减小，氧的传递速率也会改变 在最适范围内生长速度随温度升高而增加，生长周期缩短 影响细菌对营养物质的分解和吸收 三、最适温度的控制 微生物按照其生长速度的适宜温度可分为最低温度、最适温度和最高温度。最适温度是指在该温度下最适于细菌的生长。 1、根据菌种来选择培养温度 微生物种类不同，所具有的酶系及其性质不同，所要求的温度范围也不同。 如猪丹毒生长温度为30-37℃， 猪霍乱沙门氏菌生长温度为37 ℃ ， 猪多杀性巴氏杆菌生长温度为37 ℃ 。 猪链球菌生长温度为37 ℃ 2、“宁低勿高”。细菌对低温的适应性比高温强，在低温往往停止生长发育，而在高温下易死亡。 3、利用夹层通入循环水调节温度。若温度超过最适温度，立即将冷却水通入夹层中。 第 四 节 溶解氧浓度及空气流量的影响及控制 一、溶解氧对发酵的影响 在发酵过程中，微生物只能利用溶解状态下的氧（即溶解氧）。 氧的供应常常是