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根据观察目的不同，选用合适的新鲜材料，要求“精而小”, 不在于“大而多”，应注意： 　　①取材的代表性。 　　②材料新鲜，大小在0.5—1厘米，有利于固定液的透入。 　　③刀片锐利，立即固定，如不能即刻固定，须尽量防止变 干、损伤。 　　④详细记录日期、采集地点、标本名称、取材部位、固定液种类。 1、取 材 2、固 定 　　用一定的化学溶液（固定剂）在尽可能保持细胞生活结构的情况下迅速杀死组织的过程。 　　作用： 　　①防止组织溶解及腐败； 　　②使细胞内各种成分沉淀保存下来，保持它原有的生活结构； 　　③使细胞内的成分产生不同的折射率，造成光学上的差异，便于观察； 　　④使细胞硬化不容易变形，利于固定以后的处理。 酒精—甲醛—醋酸（简称F.A.A） 固定液 适用范围： 　　是生物制片中最常用的一种良好固定液和保存液。一般植物的器官和组织均可用此液来固定，称为“标准固定液”或“万能固定液”。 配法: 50%或70%酒精 90毫升 冰醋酸 　　 5毫升 甲醛 　　　 5毫升 材料在此固定液中，固定24小时即可进行脱水步骤。同时它又是良好的保存液（4℃） ，材料在此液中放置很久也无妨碍，甚至保存数年仍可制作切片。　　 常用固定液： 卡诺氏固定液 适用范围：根尖、花药、子房 配法1：95%乙醇3份+冰醋酸1份 配法2：95%乙醇6份+冰醋酸1份+氯仿3份（固定花药，观察减数分裂） 固定24h ，转入70%乙醇中，于4℃冰箱保存备用。 （若在短时间内压片观察，可保存在固定液中） ３、脱 水 材料从固定液中取出，需先冲洗。 F.A.A固定液，用50%或70%酒精冲洗。 卡诺氏固定液，用95％ 85％ 70％酒精冲洗。 脱水的步骤：（若采用整体染色法，先染色2-3天，再脱水） ①梯度酒精：50%、70%、85%、95%、100%。事先配好，随时取用。 ②从低到高，逐级脱水。100%酒精需2次。 ③各级酒精停留的时间，依材料的性质、大小、而定。根尖、茎尖、每级30分钟—1小时，草本植物组织为2小时，木本根、茎2—4小时，大的或较坚硬的材料，各级停留的时间还要延长些。在操作时，低浓度酒精可稍快些，到高浓度酒精时则不能过快，这样才能脱净水分。 ④从95%进入纯酒精后，时间不能过长，否则材料变得硬脆。为了彻底将水分脱净，需要更换两次纯酒精，每次30分钟—1小时。此时，瓶子上的塞子也应更换干燥的，以免有水分渗入。 4、透 明 二甲苯是应用较广的一种透明剂，透明力强，但缺点是材料在其中停留过久，容易发生收缩、变脆、变硬，常用氯仿（三氯甲烷）代替二甲苯。 ①将氯仿配制成下列不同的浓度,2/3乙醇+1/3氯仿、1/2乙醇+1/2氯仿、1/3乙醇+2/3氯仿、纯氯仿，事先配好，随时取用。 ②为了避免组织收缩，材料经无水乙醇脱水后，不能直接移入纯氯仿中，而必须经过以上几个级度逐渐置换，才能进入纯氯仿中。 ③材料在每级中停留时间，视组织块的大小而定，一般30分钟—2小时，在纯氯仿中应更换2次，再用纯二甲苯更换2次（20分钟1次）。 透明的目的 两次透明： 脱水以后组织块的透明； 染色以后切片的透明。 主要目的在于使组织中的脱水剂（酒精或丙酮）被透明剂所替代，使石蜡能顺利地进入组织，或增强组织的折光系数有利于光线的透过，并能与封藏剂混合进行封藏，便于显微镜的观察。 5、浸 蜡 （1）将石蜡配成下列浓度：2/3二甲苯+1/3石蜡、1/2二甲苯+1/2石蜡、1/3二甲苯+2/3石蜡、纯石蜡，事先配好，随时取用。 （2）材料放入2/3二甲苯+1/3石蜡中，将其放入36—40℃的温箱中，时间2小时。 （3）材料放入1/2二甲苯+1/2石蜡中，温度控制在45—55℃，时间2小时。 （4）材料放入1/3二甲苯+2/3石蜡中，温度控制在50—60℃，时间2小时。 （5）材料放入纯石蜡1、纯石蜡2中，温度控制在50—60℃，时间各2小时。 浸蜡应在恒温箱中进行,恒温箱的温度要适宜，太高，会使材料收缩，太低，石蜡会冻结而不能透入组织。 6、包 埋 把透足石蜡的材料包埋在石蜡里成为一定的形状以便切片。 在60℃的温箱中，换两次已溶解的纯蜡，每次约2h。包埋之前，先准备好包埋用具，一般需要镊子、酒精灯、火柴、一盆冷水及包埋用的纸盒，包埋时将融化的石蜡倒入纸盒中，迅速用烧热的镊子把材料放入并按需要的切面和一定的间隔排列整齐，然后平放入冷水中，使其快速凝固。包埋好的材料（石蜡块）