色谱分离幻灯片.pptVIP

色谱分离技术又称层析分离技术或色层分离技术，是一种分离复杂混合物中各个组分的有效方法。它是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。 色谱法(Chromatography)从二十世纪初发明以来，经历了整整一个世纪的发展到今天已经成为最重要的分离分析科学，广泛地应用于许多领域，如石油化工、有机合成、生理生化、医药卫生、环境保护，乃至空间探索等。 将一滴含有混合色素的溶液滴在一块布或一片纸上，随着溶液的展开可以观察到一个个同心圆环出现，这种层析现象虽然古人就已有初步认识并有一些简单的应用，但真正首先认识到这种层析现象在分离分析方面具有重大价值的是俄国植物学家Tswett。 ◆ 1903年 Tswett创立色谱法（在碳酸钙上分离了叶绿素）。　 由Tswett创立的色谱法分离效率低，分离时间长，根据样品的不同，一般分离需要几小时至几天。 1．色谱法的特点： —与经典的分离提纯手段（重结晶，升华，萃取和蒸馏等）相比，色谱法具有快速，简便和高效率等优点。并能对复杂化合物，甚至立体异构体进行分离。 —液相色谱（含柱，薄层色谱）适合于固体物质和具有高蒸汽压的油状物的分离，不适合低沸点液体的分离。 —气相色谱适合于容易挥发物质的分离。 2．色谱法的优点 （1）分离效率高。 （2）应用范围广。 （3）分析速度快。 （4）样品用量少。 （5）灵敏度高。 （6）分离和测定一次完成。可以和多种波谱分析仪器联用 （7）易于自动化，可在工业流程中使用。 2.根据操作压力的不同分类 低压色谱 0.5MPa 中压色谱 0.5～5MPa 高压色谱 5 ～ 50MPa 3.按操作形式： 柱色谱— 分离体系采用圆柱管 纸上色谱—固定相是滤纸或将固定相载于纸上 薄层色谱—固定相是一层吸附剂物料，平铺于惰性平板上 凝胶色谱 1）在色谱操作中，加入洗脱剂而使各组分分层的操作称为展开 2）洗脱时从柱中流出的溶液称为洗脱液 3） 展开后各组分的分布情况称为色谱 已广泛应用： 反应过程的监控和跟踪 混合物的分离 无机，有机化合物的分离 化合物原料，产物的鉴定 纯度的检验 柱色谱（column chromatography ） 一，柱色谱法是最原始的色谱方法，这种方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中，将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端，以流动相洗脱。常见的洗脱方式有两种，一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱，一种是自下而上依靠毛细作用洗脱。收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法，一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带，以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。柱色谱法被广泛应用于混合物的分离，包括对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。 薄层色谱法（thin-layer chromatography, TLC)是应用非常广泛的色谱方法，这种色谱方法将固定相图布在金属或玻璃薄板上形成薄层，用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点染于薄板一端，之后将点样端浸入流动相中，依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。薄层色谱法成本低廉操作简单，被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。 1952年马丁和詹姆斯提出用气体作为流动相进行色谱分离的想法，他们用硅藻土吸附的硅酮油作为固定相，用氮气作为流动相分离了若干种小分子量挥发性有机酸。气相色谱的出现使色谱技术从最初的定性分离手段进一步演化为具有分离功能的定量测定手段，并且极大的刺激了色谱技术和理论的发展。相比于早期的液相色谱，以气体为流动相的色谱对设备的要求更高，这促进了色谱技术的机械化、标准化和自动化；气相色谱需要特殊和更灵敏的检测装置，这促进了检测器的开发；而气相色谱的标准化又使得色谱学理论得以形成色谱学理论中有着重要地位的塔板理论和Van Deemter方程，以及保留时间、保留指数、峰宽等概念都是在研究气相色谱行为的过程中形成的 。 气相色谱被广泛应用于小分子量复杂组分物质的定量分析。 高效液相色谱 （HPLC）是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。