第二章组培基本条件课件.ppt

第二章 植物组织培养所需基本条件 第一节 培养基及其配制 第二节?? 实验室的设置 第三节 常用仪器设备和器具 第四节 环境条件 第五节 组培方案的筛选 （二）有机营养成分 1、糖类 种类：蔗糖、葡萄糖、果糖。其中以蔗糖最常用。 作用：提供碳源、能量、保持培养基的渗透压。 用量：1%～5%。 （二）有机营养成分 2、维生素类 常用的有Vc 、B1 、B6 、B12、烟酸、生物素等 。 （二）有机营养成分 3、氨基酸 常用的有：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸等 水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白（LH）是多种氨基酸的混合物，在培养基中也时常添加。 （三）植物生长调节物质 用量很小，但对外植体的生长和分化起着决定作用。影响最显著的是生长素类和细胞分裂素类。 1．生长素类 种类： 2,4-D ：2,4-二氯苯氧乙酸 NAA：萘乙酸 IAA：引哚乙酸 IBA：引哚丁酸 作用：诱导愈伤组织、胚状体的产生，试管苗生根。 2. 细胞分裂素类 种类 KT：激动素（6-糠基氨基嘌呤） 6-BA：6-苄基氨基嘌呤 ZT：玉米素 2-iP：2-异戊烯腺嘌呤。 2. 细胞分裂素类 作用 促进细胞分裂，由愈伤组织或器官上分化出不定芽，促进芽的增殖。 3、根和芽形成的激素控制特点 生长素与细胞分裂素的比值和绝对含量，控制着植物组织的形态发生。 （四）天然有机添加物 常用种类和浓度为： 椰子乳10% 酵母提取物0.5% 番茄汁5%～10% 香蕉泥100～200 mg/L 作用是提供微量营养成分、生理活性物质和生长激素等。 （五）琼脂 从海藻中提取的一种高分子碳水化合物，作为凝固剂，不参与代谢。 用量：0.6%～1.0%。 （六）活性炭 来源：用木炭粉碎加工形成。 作用：吸附作用，减轻有害物质对培养物的毒害。吸附没有选择性，在吸附有害物质的同时，也吸附有用物质。 使培养基变黑，有利于生根。 用量：0.1％－0.5%。 二、培养基的种类和选择 1、基本培养基和完全培养基 基本培养基：包括无机盐、维生素、氨基酸、糖和水等。 完全培养基：在基本培养基的基础上，根据培养目的，添加其它一些物质。如：植物生长调节物质，天然有机物（椰乳、香蕉泥等）。 2、基本培养基的种类 种类：众多，有几百种，但较常用的仅一二十种。 名称：多数以发明人的姓名来命名，如White培养基，Murashige和Skoog培养基(简称MS培养基) 4、培养基的选择 不同植物、培养部位和培养目的应选择不同的培养基。在建立一个新的实验体系时，一般先由一种已被广泛采用的培养基开始（如MS、N6、B5等） 。 三、培养基的配制方法（一）、流程图 （二）母液配制（以MS培养基为例） （二）、母液的配制 扩大倍数：10～100倍。 意义：提高工作效率，减小称量误差。药品称量一次，就可以使用多次。 2、大量元素母液（扩大10倍） 3．微量元素母液 铁盐容易形成Fe(OH)3沉淀 硫酸亚铁与Na2-EDTA混合，形成络合物。 其它微量元素分别充分溶解后混合定容为一瓶，扩大倍数为100倍。 3、微量元素母液（扩大100倍） 4、铁盐母液（扩大100倍） 5、有机物母液（扩大50倍） 6．生长调节物质母液 不溶于水，先溶于助溶剂。 NAA、IAA、IBA、2,4-D及赤霉素、玉米素等，先溶于少量95%酒精，再加水定容； KT和BA等，先溶于少量的1mol/L盐酸中，再加水定容。 6．生长调节物质母液 母液浓度：用量小，使用的浓度单位是mg/L，因此母液一般配制成0.1mg/ml，或1mg/ml； 7．琼脂、蔗糖 用量大，不需要配制母液，随称随用。 8、母液标签 注明母液名称、配制1升培养基时应取的数量。 9、母液保存 一般在2～4℃的冰箱中保存。 生霉或沉淀，就不能再使用。 3、琼脂和蔗糖的溶化 称8g琼脂、30g蔗糖放在搪瓷杯里，加入约700ml蒸馏水，电炉上加热溶化。 4．母液的量取和定容 用移液管（不能混用）或量筒将母液依次加入烧杯中。再与已溶化的琼脂、蔗糖混合、定容。 5．pH值的调整 A、不同植物对酸碱度的要求不同，多数培养基 的pH值为5.6～6.0 。 B、常用1 mol/L的NaOH和HCl调整pH值。 C、pH影响培养基的硬度。 pH ＜5.0 培养基不易凝固。 D、灭菌后，培养基的pH会降低 0.