第18章质谱法课题.pptVIP

质谱法（Mass Spectrometry, MS) 质谱法 定义：是通过将样品转化为运动的气态离子并按质荷比(m/z)大小进行分离记录的分析方法。所得结果即为质谱图。 应用：无机物、有机物和生物大分子的定性和定量分析，复杂化合物的结构分析，样品中各种同位素比的测定及固体表面的结构和组成分析等。 特点： 1.高灵敏度，只需用几微克甚至更少的试样就可分析，检出限可达10-12g。 2.能同时提供试样的精确相对分子质量和结构信息。 3.能做定性分析、结构分析和定量分析。 4.能与各种色谱有效联用，为分析复杂混合物提供有力手段。 5.分析速度快，数分钟内即可完成测试。 质谱仪 工作原理：利用特定的方法使一定量的样品发生电离，经过一个加速电场对处于离子化区的离子进行加速，再进入质量分析器中，依据，具有速度v的带电粒子进入质谱分 析器的电磁场中，根据所选择的分离方式，使各种离子按质荷比(m/z)进行分离。分子质谱研究中的几种离子源 离子源 磁质量分析器原理 单聚焦磁场分析器 双聚焦分析器 飞行时间质量分析器 离子分离采用非磁方式，用一根长约1米的无磁漂移管 四极滤质器 离子阱 离子回旋共振分析器 （1）质量测定范围 表示能够进行分析的样品的相对原子质量（或相对分子质量）范围。采用原子质量单位u或D（Dalton)表示。 1u=1.66054 x 10-27kg/12C原子 一个质子 1H=1.008665u 在质谱法中使用三种不同的质量概念：标称质量、精确质量和平均质量 标称分子质量是从化学组成在自然界中最大丰度同位素的标称原子质量计算而得。 精确分子质量是用自然界中最大丰度同位素的精确原子质量计算而得。精确原子质量是以12C 同位素的质量12.0000为基准而确定的。 平均分子质量是用化学组成的平均原子质量计算而得。（2）分辨本领表示质谱仪把相邻两个质量分开的能力，定义为：对两个强度相等的相邻峰，当两峰间的峰谷不大于其峰高10%时，则认为两峰已分开，其分辨率（3）灵敏度绝对灵敏度：仪器可以检测到的最小样品量 相对灵敏度：仪器可以同时检测的大组分与小组分含量之比 分析灵敏度：输入仪器的样品量与仪器输出的信号之比 分子离子（母离子）：试样分子在高能电子撞击下产生的正离子，分子离子的质量相当于中性分子的相对分子质量同位素离子 有些元素具有天然存在的稳定同位素，这些元素形成化合物后，各种同位素就以一定的丰度出现在化合物中，它们在质谱分析中形成同位素离子。 同位素离子峰对分子离子峰的相对强度等于离子中存在该元素的原子数目乘该同位素的相对丰度。 碎片离子 分子离子在离子源中碎裂生成的，一般强度最大的质谱峰相应于最稳定的碎片离子。通过各种碎片离子相对峰高的分析，有可能获得整个分子结构的信息。 发生碎裂的规律： 1.键能小的共价键先断裂 2.碳链分枝处易发生断裂，且优先失去最大基团 3.形成共轭效应更强体系的碎片，其断裂几率更大 离子在离开电离室到达质量分析器之前的飞行过程中，发生分裂而形成的低质量的离子。 亚稳离子峰具有离子峰宽大、相对强度低、m/z不为整数等特点而易被观察。通过亚稳离子峰可以获得有关裂解信息，可找到相关母离子的质量和子离子的质量，从而确定裂解途径。 重排离子 在两个或两个以上键的断裂过程中，某些原子或基团从一个位置转移到另一个位置所生成的离子。 多电荷离子 某些分子失去两个或两个以上的电子所形成的离子。双电荷离子在质谱图中出现在相同质量数的单电荷离子质荷比的二分之一处。一些有机大分子如多肽、蛋白质等形成多电荷离子，使m/Z在2000范围之内仍可分析分子量达40,000甚至更高的分子 。 质谱定性分析 相对分子质量的测定 分子离子峰的质荷比在数值上等于相对分子质量 分子离子峰的判断 1.除同位素峰外，它是最高质量的峰 2.分子离子峰的质量数要符合“氮律”，即在只含C、H、O、N的 化合物中，不含或含偶数个氮原子的分子的质量数为偶数，含有奇数个氮原子的分子的质量数为奇数。 3.存在合理的中性碎片损失 4.在EI源中，若降低电子轰击电压，则分子离子峰的相对强度应增加；若不增加，则不是分子离子峰。 化学式的确定 1.由高分辨质谱数据确定分子式 2.由同位素丰度比法求分子式 由质谱图或质谱数据算出IM+1/IM或IM+2/IM的值，可从Beynon表中查出最可能的化学式，再结合其他规则，确定化学式。 根据谱图中的碎片离子峰、亚稳离子峰、分子离子峰等信息以及化合物的分裂规律，找出各碎片离子产生的途径，拼凑出整个分子结构，再进一步验证所得结果。 验证的方法: 查该化合物的标准质谱图，看是否一致 用标样作质谱图，进行谱图比较 质谱定量分析 依据：质谱检出的离子流强度与