01_蛋白质的理化性质.ppt

六、蛋白质的颜色反应 7. 乙醛酸反应—色氨酸的特有反应 在蛋白质溶液中加入HCOCOOH，将浓硫酸沿管壁缓慢加入，不使相混，在液面交界处，即有紫色环形成 色氨酸的反应（吲哚环的反应） 鉴定蛋白质中是否含有色氨酸 明胶中不含色氨酸 六、蛋白质的颜色反应 8. 坂口反应—精氨酸特有的反应 精氨酸的反应（胍基的反应） 精氨酸与α-萘酚在碱性次氯酸钠（或次溴酸钠）溶液中发生反应，产生红色产物 鉴定蛋白质中是否含有精氨酸 定量测定精氨酸 七、蛋白质的紫外吸收性质 大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。 这三种氨基酸在280nm 附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在280nm 附近显示强的吸收。可以对蛋白质进行定性和定量检测。 蛋白质浓度（mg/ml） =1.45A280—0.74A260 蛋白质的分离纯化 一、分离纯化的基本方法 1、盐析与等电点沉淀---根据溶解度不同分离 2、层析法 离子交换层析法---根据电荷不同分离 凝胶过滤法---根据分子量、分子形状不同分离 亲和层析---根据特异性亲和力不同分离 3、梯度离心法 第三章蛋白质的理化性质 蛋白质的理化性质 一、两性性质及等电点 二、胶体性质 三、变性与复性作用 四、蛋白质的沉淀作用 五、蛋白质的颜色反应 六、蛋白质的紫外吸收性质 一、蛋白质的两性解离与等电点 蛋白质分子中氨基酸残基的侧链上存在游离的氨基和羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离性质，具有特定的等电点（pI）。 溶液pH＝pI时，蛋白质所带正负电荷相等； pH＞pI时，蛋白质带净负电荷； pH＜pI时，蛋白质带净正电荷。 等电点时特点： （1）净电荷为零 （2）一定离子强度的缓冲液：等离子点特征常数 （3）多数蛋白质在水中等电点偏酸（较低） 碱性AA/酸性AA 等电点 胃蛋白酶 0.2 1.0 血红蛋白 1.7 6.7 细胞色素C 2.9 10.7 菊糖酶 0.34 8.2 （4）导电性、溶解度、黏度及渗透压都最小。 蛋白质分子在一定pH的溶液中可带净的负电荷或正电荷，故可在电场中发生移动。 不同蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的移动速度也不同，据此可互相分离。 二、蛋白质的胶体性质 蛋白质分子的颗粒直径已达1~100nm，处于胶体颗粒的范围。（亲水胶体） 蛋白质具有胶体溶液的性质：布朗运动、丁道尔现象、不能透过半透膜、具有吸附力等。 1、蛋白质具有胶体溶液的性质 二、蛋白质的胶体性质 2、稳定蛋白质亲水溶胶的两个重要因素： 水化膜 ---- 通过氢键与水结合 表面电荷---- 在非等电点状态下，双电层，带 同性电荷蛋白质分子互相排斥。 蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 3.蛋白质胶体性质的应用 渗析（透析） 超滤 二、蛋白质的胶体性质 三、蛋白质的变性、复性与凝固作用 在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质严格的空间结构被破坏（肽键不断裂，一级结构不变），从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变，称为蛋白质的变性(denaturation)。 What’s denaturation of protein? 1、变性理论 蛋白质的变性就是天然蛋白质分子中肽链的高度规则的紧密排列方式因氢键及其他次级键的破坏而变成不规则的松散排列方式。 2、引起蛋白质变性的因素： ① 物理因素： 高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波、机械搅拌 ② 化学因素： 强酸、强碱、有机溶剂、尿素、胍、重金属盐等。 变性的因素及作用机制 ① 物理性质： 旋光性改变，溶解度下降，结晶能力下降，沉降率升高，粘度升高，光吸收度增加等； ② 化学性质： 官能团反应性增加，呈色反应增强，易被蛋白酶水解。 ③ 生物学性质： 原有生物学活性丧失，抗原性改变。 变性蛋白质的性质改变 蛋白质变性的可逆性－复性： 某些蛋白质变性后可以在一定的条件下重新形成原来的空间结构，并恢复原来部分理化特性和生物学活性，这个过程称