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日常维护和常见色谱故障 Column Installation柱安装 Each column has a defined flow direction! The flow direction is shown by the arrow or direction of writing. Don’t change the flow direction, this will decrease column performance. Column Installation Column Installation cont. Page 271 溶剂准备：过滤 防止固体颗粒损伤仪器或柱头 使用小于 0.5 ? m过滤膜. 有机物 - Teflon 水 - Nylon 66 使用HPLC纯溶剂 过滤装置 真空 溶剂过滤 不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。 遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命： 使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。 用滤膜过滤溶剂去除微生物。 每两天更换或过滤溶剂。 避免溶剂瓶直接日照。 溶剂信息 避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂： 卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。 能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。 含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。 在有机溶剂中的有机酸溶液。 含有强络合剂的溶液。 四氯化碳和异丙醇或THF混合液。 Name Acetic Acid Acetone Acetonitrile Benzene Butyl Alcohol Carbon Tetrachloride Chloroform Cyclohexane Cyclopentane Dichloroethane Dichloromethane Dimethylformamide Dimethyl Sulfoxide Dioxan Ethylacetate Ethyl Alcohol Di-Ethylether Heptane Hexane Methyl Alcohol Methylethyl Ketone I-Octane Pentane I-Propyl Alcohol Tetrachloroethane Tetrahydrofuran Toluene Acetic Acid Acetone Acetonitrile Benzene Carbon Tet Chloroform Cyclopentane Butyl Alcohol Cyclohexane Dichloroethane CH Cl 2 2 DMF DMSO Dioxan Ethylacetate Ethyl Alcohol Di-Ethylether Heptane Hexane Methyl Alcohol MEK I-Octane Pentane I-Propyl Alcohol Di-Propylether C H 2 2 Cl 4 THF Toluene Trichloroethane Water Xylene Trichloroethane Water Xylene Di-Propylether Immiscible Miscible 溶剂的相溶性 溶剂的紫外吸收 Solvent UV Cutoff (nm) Acetonitrile 190 Water Cyclohexane 195 Hexane 200 Methanol 210 Ethanol 210 Diethyl Ether 220 Dichloromethane 220 Chloroform 190 240 Carbon Tetrachloride 265 Tetrahydrofuran 280 (210) Toluene 280 UV Cutoff is the wavelength at which absorbance equals 1 AU. 溶剂脱气 目的 脱气方法 He脱气 排除溶解在流动相中的氧气和氮气 回流加热脱气 真空脱气 超声脱气 准备流动相 流动相应该： HPLC 级 过滤 (最大0.45 um, 0.2 um最好) 脱气，尤其在低流速时 相溶 初始化HPLC泵 移走溶剂与系统中的气泡 使溶剂组成变化更容易 确保分析结果再现性 对于反相柱使用5～10倍 柱体积流动相平衡色谱柱 Flow 柱平衡 初始化和平衡 预柱和保护柱 从泵来的 流动相 预柱 进样口 保护柱 分析柱 至检测器 预柱是针对流动相来保护色谱柱 保护柱是针对样品来保护色谱柱 每根柱子都定义一个流动方向. 这个流动方向用箭头或其他方式显示在柱子上.