第三章细胞工程..pptxVIP

第 3 章细胞工程动物的细胞与组织培养 定义：从动物体内取出组织或细胞，模拟机体内生理环境，在体外建立无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能的方法。1 动物细胞培养群体培养（mass culture）：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层克隆培养（clonal culture）：培养高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。群体培养（左）和克隆培养（右） 原代培养 （primary culture）：即细胞或组织离开机体后的首次培养。primary culture - started from cells, tissues or organs taken directly from an animal传代（passage） ： 培养的细胞生长到一定的密度后转移到新的容器中培养或需要更换到新的培养液称为传代或传代培养。subculture - the transplantation of cells from one culture to another (passaging)细胞系（cell line）：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代或传代数有限，可称为有限细胞系。如果可以连续传代则称为连续细胞株。原代培养细胞成功传代即为细胞系。cell line - arises from the primary culture at the time of the first subculture - finite life spancontinuous cell line - a cell line which has been transformed - infinite life span细胞株（cell strain）：从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。2发展历史动物细胞（组织）培养技术起源于19世纪所应用的某些胚胎学技术。动物细胞（组织）培养的奠基人是美国生物学家Harrison。在1907年采用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，保持存活了几周时间，并观察到细胞突起的生长过程。Harrison - - isolated pieces of frog embryonic tissue known to give rise to nerve fibres - grew them in frog lymph - observed outgrowth of axons over period of weeks in 1907. 法国学者Carrel1923年设计的卡氏培养瓶，用鸡胚抽提液培养心肌组织取得成功并维持34年之久,特别注意到实验中的无菌操作。实验室中常用的几种细胞系细胞系名称细胞类型来源3T3成纤维细胞小鼠HeLa宫颈癌上皮细胞Henrietta Lacks BHK21成纤维细胞叙利亚仓鼠PtKl上皮细胞袋鼠L6成肌细胞大鼠PCI2嗜铬细胞大鼠SP2浆细胞小鼠SP2／0骨髓瘤浆细胞小鼠CHO卵巢细胞中国地鼠Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 3.1.1 动物细胞的特点与微生物、植物细胞相比，动物细胞有哪些特殊之处？动物细胞与微生物细胞相比，主要有以下不同：（1）动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁。（2）动物细胞倍增时间长，生长缓慢，易 受污染。（3）培养过程需氧量少，对机械搅拌或剪 切力敏感。（4）动物细胞间主要以聚集体形式存在。（5）原代细胞一般繁殖50代左右即退化 死亡。3.1.2 体外培养 原代培养（亦称初代培养）传代培养（亦称继代培养）。Primary Cultureoutgrowth and migration of cellsretention of the 3D shape解剖分离解聚离体培养3.2.1 体外培养的条件 与微生物细胞培养相比动物 细胞培养的特殊性大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体的表面才能生长。 动物细胞对于营养要求更加苛刻，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需要血清。 对于培养环境的适应性更差，对环境极其敏感，包括 pH 、溶解氧、温度、剪切力等都比微生物有更高的要求，一般需严格监控。 动物细胞生长缓慢，因此培养时间较长。 对环境的影响又比微生物为大，因此常用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH。 培养条件TemperaturepHDi