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实验八 大分子物质的水解试验 一、实验目的 1.证明不同微生物水解常见几种大分子物质的能力不同,并进一步证明不同微生物具有不同的酶系统。 2.掌握微生物大分子水解实验的原理和方法。 二、实验原理 1. 微生物对生物大分子(如淀粉,蛋白质,脂肪)不能直接吸收利用,只有能够产生并分泌胞外水解酶的微生物才能利用大分子有机物。 2.根据平板(含所测大分子物质)上菌落周围是否有水解圈可判断菌株水解能力的有无及强弱。该法具有快速、准确的优点,常用于菌种初步鉴定和筛选。 三、实验材料 1.菌种:大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。 2.培养基和试剂:固体淀粉培养基、明胶培养基、碘液、无菌培养皿。 3.器材:接种环、接种针、酒精灯等。 * * 淀粉 淀粉酶 糊精 双糖、单糖 加碘(蓝色) (蓝红 ) (无色) 水解 脂肪 脂肪酶 甘油+脂肪酸 pH↓ 水解 加中性红(浅红) (深红) 蛋白质(明胶) 氨基酸 25℃以下 (固体) (液体) 蛋白酶 水解 (1)制固体淀粉培养基平板;冷却凝固。 四、实验方法 注意无菌操作 1. 淀粉水解试验 (2)标记后将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌接种。 大肠杆菌 枯草杆菌 (3)36℃恒温倒置培养1-2d; (4)观察生长情况,将平板打开盖子,滴入少量碘液于平皿中,轻轻旋转平板,使碘液均匀铺面整个平板; (5)判断结果并记录。 2.明胶水解试验 做标记------穿刺接种------培养(20℃ 2-5d)-- ----------观察液化情况。
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