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Trizol提取RNA、DNA、蛋白质步骤 1st step RNA的提取 一、材料 。 二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180 2小时）装蒸馏水，然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。 氯仿4.00 mL 10×FA gel buffer 3.84 mL 甲酰胺 2.00 mL 100%的甘油 720.00 μL 37%（约 12.3 M）的甲醛 80.00 μL 0.5 M 的 EDTA（pH8.0） 16.00 μL 水饱和的溴酚兰（若颜色太淡，可以加 40 μL） 100.00 μL DEPC 水 分装 1.5 mL 离心管，除常用的 4℃保存外，其余-20℃保存。 1.5 1×甲醛变性胶电泳缓冲液（1×running buffer）：20 mL 10×FA gel buffer，4.0 mL 37% 的甲醛，176 mL 水。 1.6 1.2%的甲醛变性胶：称 0.4 克琼脂糖，加入 3.34 mL 10×FA gel buffer，加 30 mL DEPC 水，微波炉融化，冷至约 60℃，加 0.6 mL 37%的甲醛，倒入 7.5×5.0 cm 的凝胶模具中。四、操作步骤 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA 可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。 1、组织mg组织将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。 2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。 3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟。 4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4下7500g离心5分钟。 5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55-60℃水溶 10分钟。RNA可进行，或贮存于70%乙醇并保存于-70。  2nd step DNA的提取 一、材料 二、设备 冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、乙醇75%乙醇75%乙醇四、操作步骤 1样品加氯仿分层后,移去上层水相,用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1ml?TRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2-8不超过2000×g离心5分钟。 2移去上清，（如需分离蛋白质，可保留，进一步操作见后）用含10%乙醇的0.1M柠檬酸钠洗涤DNA沉淀。每用1ml?TRIzol加入1ml，室温放置30分钟，2-82000×g离心5分钟，弃上清，重复一次。 3用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml?TRIzol加入1.5-2?ml?75%乙醇,室温放置10-20分钟(不时颠倒混合)2-82000×g离心5分钟,?弃上清。 4室温放置晾干DNA?5-15分钟，用8mM?NaOH溶解DNA。从50-70mg组织或107细胞中分离的DNA溶于300-600μl?8mM?NaOH，DNA的浓度通常为0.2-0.3μg/μl?。提取的DNA沉淀不易溶于水和Tris缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mM NaOH的pH值为9，溶解DNA后可用TE，HEPES调节pH。从某些样品（尤其是组织）中提取的DNA中可能包含一些胶状不溶物可12000×g离心10分钟除去。DNA mark landa Hind Ⅲ 5uL 作为参照）DNA的定量：取一份溶于8mM?NaOH的DNA加水测A260值。一单位A260值相当于50μg/ml双链DNA。根据DNA产量可估计细胞数，人，大鼠，小鼠1×106二倍体细胞含DNA的量分别为7.1μg?,?6.5μg?,?5.8μg?。 预期产量：1mg组织或1×106细胞提取DNA分别为肝和肾3-4μg?骨骼肌，脑组织，胎盘2-3μg?人，大鼠，小鼠培养细胞（1×