含氮化合物的分析检验课件.ppt

1、蛋白质测定的意义： 氮是微生物生长繁殖必需的营养要素之一。酒类产品中的含氮化合物主要来源于原料，原料中蛋白质含量的高低不仅影响微生物的生长繁殖，还直接影响产品的质量。 （1）只有通过原料中总氮的测定，才能了解原料中蛋白质的含量，从而有利于对原料的选取； （2）只有通过总氮的测定，才能了解半成品或成品中总氮、可溶性氮的含量。 操作步骤： ①消化： 精密称取0.20—2.00g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20mL液体样品(相当于氮30-40mg)，小心移入已干燥的500mL定氮瓶中，加入0.5g硫酸铜，10g硫酸钾及20mL硫酸，稍摇匀后，于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°斜支于有小圆孔的石棉网上，小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体沸腾（微沸）。至液体呈蓝色澄清透明后，再继续加热0.5h，放冷。 消化管先小火加热，待泡沫停止后加强火力，保持管内液体微沸，至溶液呈蓝绿色澄清透明后，再加热0.5h。冷却后加水定容（数次冲洗，使溶液全部注入容量瓶）。时做空白试验。 5、消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消化完全。 6、 蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。氢氧化铜在70～90℃时发黑。 怎样区分是否加入含氮物? 在凯氏定氮法测定样品的总含氮量之后, 再取一份样品, 先用三氯乙酸处理样品, 让蛋白质形成沉淀。 皮革奶 皮革水解蛋白的检测难度比三聚氰胺更大，因为它本来就是一种蛋白质。 目前农业部规定的检测方法，主要是检查牛奶中是否含有皮革水解蛋白，这是动物胶原蛋白中的特有成分，在乳酪蛋白中则没有，所以一旦验出，则可认为含有皮革水解蛋白。 所谓皮革水解蛋白粉，是指利用皮革生产过程中部分不能使用的皮革、毛发、毛囊等物质，甚至是动物屠宰场所收集的毛发类物质，通过化学方法加工，使之水解成为蛋白质。 这种方法水解出来的蛋白质，由于加工过程中带入了重金属铬，原材料本身带来的诸如二噁英、多氯联苯等毒害物质，使其不可能作为食品或者药品级的添加剂。 应用举例啤酒中蛋白质的区分的测定 氨基酸的分离与测定 一．薄层色谱法（薄层层析法（TLC 法） Thin Layer Chromatography 简介： 近年来发展起来的一种微量而快速的层析方法，它把吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板上成一薄层，把样品点在薄层上，然后用合适的溶剂展开，从而达到分离、鉴定和定量的目的。因为层析在薄层上进行，所以称为薄层层析。它的应用范围比纸上层析更广泛，常用来分析氨基酸、农药残留量、黄曲霉毒素等。 （一）原理： 取一定量经水解的样品溶液，滴在制好的薄层板上，在溶剂系统中进行双向上行法展开，样品各组分在薄层板上经过多次的被吸附、解吸、交换等作用，同一物质具有相同的Rf值，不同成分则有不同的Rf值，因而各种混合物可达到彼此被分离的目的。然后用茚三酮显色，与标准氨基酸进行对比，鉴别各种氨基酸种类，从显色斑点颜色的深浅可以大致确定其含量。 Rf = a / b a b 样点 溶剂前沿 点样原点 优点： ① 展开时间短，一般在20—30分钟，展开距离通常只需10 cm，且分离效果好。 ② 层析后得到的斑点小而清晰。 ③ 能够使用多种显色剂。 ④ 点样量少，灵敏度高。（比纸层析高10—100倍） 精确到0.01ug。 ⑤ 也可用于大量分离＞500 mg，作为样品制备层析。 缺点：Rf值重现性比纸上层析差。 分类：按层析的原理可分为：吸附、分配、离子交换、凝胶等。 （三）操作方法： ① 薄层板制备 ② 样品液制备 ③ 点样：距薄板底端2cm处，用针画一标记作为 原点。再以点样距扳子宽窄可点几个点同时 展开，点与点之间间隔1～2cm。 a.可用毛细玻璃管、微量吸管或微量注射器。注 意要等一个点干了再点另一个点。 b.用一小直径ф3 mm 滤纸片，浸入样液，埋到 板子上先挖好一个小洞穴。 ④ 展开：点样完了，放入密闭容器中（展开槽），倾斜一定角度10～30°，下端浸入展开剂1cm，千万别让溶剂浸过了样点。到离顶端一部分，取出样板、晾干、显色。 a.展开剂的有关情况：主要是低沸点的2～3种有机溶剂组成的溶剂系统，分离效果主要决定于展开剂的选择，因为吸附剂在一定情况下是恒定的，吸附剂的选择余地远远小于展开剂的选择。 b.展开剂的选择方法： Ⅰ.微量圆环法。 Ⅱ.用小载波片试验，微量展开剂展开5cm。 Ⅲ.图解法： 样品极性小，选吸附剂活性高，展开剂极性低的。 样品极性大，选吸附剂活性低，展开剂极性高。 有机溶剂极性由小到大为： 石油醚、环己烷、四氯化碳、