色谱法概论..pptVIP

色谱法概论 容蓉 课件下载： jhq@sdutcm.edu.cn 405405 第一节 概述 一、色谱法(Chromatography)的发展 一些经典的分离方法：沉淀、蒸馏和萃取 现代分析中，大量采用色谱和电泳分离方法。 迄今为止，色谱方法是最为有效的分离手段！ 其应用涉及每个科学领域。 历史： 1903年，俄国植物学家 Mikhail Tswett 最先发明。 植物色素分离见图示 色谱法的发展历史 早期的色谱技术只是一种分离技术而已，与萃取、蒸馏等分离技术不同的是其分离效率高得多。当这种高效的分离技术与各种灵敏的检测技术结合在一起后，才使得色谱技术成为最重要的一种分析方法，几乎可以分析所有已知物质，在所有学科领域都得到了广泛的应用。 高效液相系统 二、色谱法的几个重要术语* 1. 色谱柱（column） 在茨威特实验中,装有CaCO3的玻璃管,即是一根色谱柱(是指包括CaCO3的管). 2. 固定相 (stationary phase) 在柱内固定不动的一相称固定相,如CaCO3. 3. 流动相(mobile phase) 在柱内不断流动的一相,称流动相,如石油醚. 4. 被分离组分（样品） 如色素 5. 洗脱 将流动相连续不断地加入色谱柱,使之通过固定相,把被分离的物质冲洗出柱的过程,叫洗脱。 洗脱是色谱过程中必要而又重要的步骤—选择适宜的流动相、固定相实现分离。 6. 洗脱剂 在洗脱过程中加入色谱柱的流动相即洗脱剂。 7. 洗脱液(流出液) 流出色谱柱的溶液,即洗脱液。 三、色谱法分类 1．按两相分子的聚集状态分： 续前 2．按分离机制分： 续前 3．按固定相的固定方式分： 4. 按使用目的分类 分析用：实验室、便携式；分析样品量少 制备用：实验室用、工业用；纯物质制备，如高纯试剂、蛋白质、手性药物拆分和纯化 流程用：工业生产流程在线连续使用 一、色谱分离依据简介 分离任何物质都要依据它们性质的差异。 例如蒸馏是利用沸点的差异，沉淀、结晶是利用溶解度不同。 在色谱当中，是利用物质在两相中溶解、亲和、吸附或其它亲和作用力的不同，使混合物中各组分达到了分离。 例如：分离含A、B两种组分的混合溶液。 当组分进入柱后，由于组分与固定相间的亲合力，就要被固定相所滞留，即固定相对组分有滞留作用（保留作用），组分的性质不同，则固定相对不同组分的滞留能力（保留能力）不同。 组分与固定相之间的亲合力越大，则固定相对该组分的滞留越强烈。它随流动相移动的速度就较慢；反之，组分在柱内的移动速度快；从而造成了A、B在柱内的差速迁移，即移动速度不同。 当经过一段距离后，速度的差异造成A、B组分先后出柱，得到分离。这就是色谱过程的本质。 掌握的要点： （1）组分在柱内随流动相不断移动（溶解于流动相）。 （2）固定相与组分有亲合能力，即对组分有滞留能力（保留能力），使组分的速度低于流动相速度。 （3）性质不同的组分与固定相亲合力不同，固定相对其滞留能力（保留能力）不同，造成迁移速度不同（差速迁移）。 （4）经过一定柱长后，各组分因速度差异而分开，即需要一定的柱长。 二、色谱流出曲线（色谱图） 所谓色谱流出曲线，即流出液中的组分浓度随洗脱体积或洗脱时间的变化曲线，也称色谱图。 获得： （1）间隔一定时间或一定流出体积，测定流出液中组分的浓度，以浓度（检测信号）为纵坐标，时间或体积为横坐标，描点作图即得 （2）在柱子出口处设置检测器，如测定流出液的吸光度，换算成浓度（信号值），连续记录流出液的检测信号随时间的变化，即得色谱图（仪器化）。 流出曲线是柱内组分分离结果的反映，是研究色谱分离过程机理的依据，也是定性、定量的依据。 色谱流出曲线的意义： 色谱峰数=样品中单组分的最少个数； 色谱保留值——定性依据； 色谱峰高或面积——定量依据； 色谱峰宽或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。 三、几个重要的色谱参数及概念 （1）基线：在实验条件下，当只有流动相通过（检测器）色谱柱时，得到的流出曲线，通常为一水平直线称为基线。 （2）峰高（h）：从色谱峰到基线的垂直距离。 （3）峰宽（Wb）：从色谱峰的捌点作切线，与基线两交点之间的距离，也称基线宽度。 （4）半峰宽（W1/2）：色谱峰高一半处峰的宽度（不是峰宽的一半） （5）标准偏差（σ）：色谱峰两侧两捌点之间的距离的一半，也即0.607h处的峰宽的一半。 Wｂ、σ、W1/2色谱意义： 它们反映被分离的组分分子在柱内迁移时的离散程度,Wｂ、σ、W1/2越小，表示分子相对集中； Wｂ、σ、W1/2 越大,表示分子相对分散。 （6）拖尾因子T: 0.95～1.05，色