培养基配制2016010.docVIP

实验报告： 实验目的、实验原理、实验步骤等 培养基母液的配制 培养基的配制（包括灭菌、包裹） 外植体灭菌及接种 实验结果观察与分析 继代培养基配制 继代培养 诱导发芽 诱导生根 驯化移栽 收获及鉴定 培养基母液配置9-25） 清洗器皿（初次使用注意事项）并晾干。 配置N6培养基等母液（每种母液体积100ml） 培养皿（每个）清洗、晾干、报纸包裹、线绳捆扎、灭菌烘干 蒸馏水灭菌 天平的用法：水平调节；称重时需要关好天平所有玻璃窗。 药品内部的塑料盖，记得盖上，如果不明，擦拭干净再盖上。 定容：先称2/3体积水，然后顺序加试剂，前一试剂溶解后，加另一试剂，最后用滴定瓶定容。 值日：清洁桌面、地面；所有物品使用后归位（天平盖上罩子）；座椅归位； 不迟到早退， 需要的克数=（0.166g/147g）*165g摩尔浓度=0.166/147=x/165N6培养基母液（： 本次实验做00ml 10x （稀释后可制成1升培养基，可用于33个培养皿） KNO3 2.830g CaCl2·2H2O 0.166g MgSO4·7H2O 0.135g KH2PO4 0.400g (NH4)2SO4 0.463g 注：配制时按表中所列顺序逐一添加，每种成分溶解后再溶解另外一种成分。 B5微量母液： 1000ml (100X倍)含 KI 0.0750g H3BO3 0.3000g MnSO4·H2O 1.0000g ZnSO4·7H2O 0. 2000g Na2MoO4·2H2O 0.0250g CuSO4·5H2O 0.0025g CoCl2·6H2O 0.0025g 注：本次实验各试剂用量过少，精确度不够，可全班做100。天平用万分之一天平。B5有机母液：烟酸（Nicotinic acid，单独试管盛放）1g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基）（100毫升培养基需要0.1毫升，） 盐酸吡哆醇(VB6) 0.001g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基）（100毫升培养基需要0.1毫升） 盐酸硫胺素(VB1) 0.010 g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基）（100毫升培养基需要0.1毫升） 肌醇(myo-Inositol) 0.010 g/ml（每班称取0.2g，加入20ml蒸馏水, 可制作60个培养基） 4)铁盐： 本次实验做：100ml (100倍) FeSO4·7H2O 0.278g Na2EDTA·2H2O 0.373g 注：配制顺序如下 称取0.278g FeSO4·7H2O溶解于20ml去离子水中（）。 称取0.373g Na2-EDTA·2H2O溶解于20 ml去离子水中（）。 将置于70水浴锅中直至溶质完全溶解（C）。 将A倒入C中混合，置于70水浴锅中保温2h（小时）。 定容至100ml。 5）激素激素 溶解方法 母液浓度 6-BA 加稀碱溶解（1M NaOH），再用蒸馏水定容 1 mg/ml NAA 加碱溶解（1M NaOH），再用蒸馏水定容 1 mg/ml2，4-D 加少量酒精溶解，再用蒸馏水定容0.00025 mg/ml 培养基配置及灭菌（10） 移液器的使用 灭菌，晾凉：培养皿、蒸馏水（开、关盖子）后，培养皿烘干。 （2-3小时）培养基配制：母液称量、添加琼脂、调节pH、导入三角瓶，灭菌，凉到50-60度左右，摇匀，分别注入培养皿（） 超净台风干后，保鲜膜包装，放入4度冰箱，可挑选一培养皿（包好）放于2度，进行污染观察。 准备的药品2，4-D 加少量酒精溶解，再用蒸馏水定容 0.25 mg/ml1N NaOH（4g溶于100 ml水中）1N HCl（ 8.3 ml溶于91.7 ml水中） 70%酒精（70 ml酒精溶于30 ml水） 培养基配方 每分别放到三角瓶里，封口， 每1含有： N6大量元素（10x）： 10ml B5微量： 1ml 铁盐： 1ml 烟 酸： 0.1 ml 盐酸吡哆醇： 0.1 ml 盐酸硫胺素： 0.1 ml 肌 醇： 1ml L-pro: 0.28g 蔗糖： 3g CH （Casein acid hydrolysate）: 0.03g 2,4-D : 1ml Phytagel: 0.7g（1g的琼脂条） PH值： 5．8 （二）培养基配置 （1）在配置培养基时取适量(配置培养基总量的2/3左右)的蒸馏水放入容器内。 （2）把放在电磁炉上加热，同时加入剪断的琼脂条。 （3）不停搅拌，防粘锅，同时加速溶解。 （4）按量称取蔗糖并加入，同时搅拌。 （5）待琼脂条、蔗糖完全溶解后加入母液、母液（80左