交叉配血实验笔记.docVIP

? ?实验八 交叉配血试验 ? ? 交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象（见图4-3-1-1）。输血时，一般主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集；其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。前者叫交叉配血试验的主侧（也叫直接配血），后者叫交叉配血的次侧（也叫间接配血）。只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”，才能进行输血；如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。 【实验目的】学习交叉配血的三种常用方法。 【实验对象】 人体（学生自愿者）。 【实验器材和药品】 1．仪器 显微镜，离心机。2．器械 采血针，消毒注射器，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔。3．药品 标准A血清，标准B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。 【实验步骤和观察指标】 图4-3-1-1 交叉配血示意图 （一）红细胞悬浮液的配制 按需要型别，取全血1ml，加等渗盐水2 ～3ml，充分 摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水2 ～3ml 按上述方法洗涤，共三次，取压积红细胞5 滴，加新鲜等渗盐水4 ml ，即成5 ％红细胞悬液。 （二）交叉配血 基本原理见图4-3-1-1示。 盐水介质交叉配血试验 实验原理 天然IGM类血型抗体与对应的红细胞抗原在室温下盐水介质中发生凝集现象。可以检查供、受者血清中是否存在破坏对方RBC的IgM抗体（ABO血型中抗A抗B抗体以IgM抗体为主）。 实验步骤 取二试管，分别注明“主”、“次”字样，主侧滴入供血者红细胞悬液一滴和受血者血清一滴；次则滴入受血者红细胞悬液一滴和供血者血清一滴。混匀后1000rpm离心1min，取出观察结果。如两侧均无凝集现象，可多量输血；如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血；如主侧凝集则不能输血。 低离子聚凝胺介质交叉配血试验 实验原理 红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM)，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。 其后，加入凝聚胺溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液,悬浮液具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。 实验步骤 1 取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2滴，加供血者3%~5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴，次侧管反之。 2各加LIM0.6ml,混合均匀后，再各加凝聚胺溶液2滴，并混合均匀。 3用离心机1000转/min离心1min，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。 4轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须要重做。 5最后加入重新悬浮液 2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。如果在60秒内凝集散开，代表是由凝聚胺引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。 微柱凝胶介质交叉配血试验 实验原理 利用抗原抗体特异性反应的作用→通过离心技术→利用凝胶的微孔过滤作用，将发生凝集反应的RBC阻滞于凝胶之内，而未凝集的单个RBC则穿过微孔运动至柱底→从而区分有无凝集。 实验步骤 见PPT所述。结果判定肉眼直接观察。 （三）实验注意事项 1.器材、试剂、反应温度、离心、标本等注意事项同ABO血型鉴定。 2.血清优于血浆；不用溶血标本；配血后，标本置冰箱内保存至少7天 。 3.RBC要用生理盐水洗干净。 4.溶血现象，实质是阳性结果，为配血不合。 5.ABO血型系统同型而不容，应首先排除ABO血型鉴定是否有误。 6.盐水介质法仅能检测IgM型RBC血型抗体，不能检测IgG型RBC抗体。凝聚胺法可以检查出IgG型的血型抗体 7.临床输血进行交叉配血试验时，应当首先进行盐水介质法试验， 再进行聚凝胺介质法试验。 8. 聚凝胺介质法试验尽快观察结果(＜3min) 9.聚凝胺溶液必须保存在深色塑料瓶中。 10. 聚凝胺介质法试验中遇到用含肝素的血标本，要多加聚凝胺。 【思考题】 1.在无标准血清情况下已如某人为A或B型，能否用其血去检查未知血型