四 蛋白质的四级结构 (quaternary structure) 二、 蛋白质的分离纯化 (四) 层析 层析种类: 凝胶过(分子筛) 离子交换层析(阴离子和阳离子) 亲和层析 四、蛋白质空间结构的测定 分类:根据支持物的不同,电泳电泳可分为: 薄膜电泳、凝胶电泳…… (二)电 泳 概念:带电颗粒在电场中向着所带电荷相反 方向移动称为电泳。 原理:不同的蛋白质的因结构、形状和带电 量的不同而有不同的泳动速度,从而 达到分析和分离蛋白质的目的 应用:电泳技术是生化常用分析技术之一 利用压力或离心力强行使水和小分子杂质通过超滤膜(一种半透膜)除去,而蛋白质留在膜上,称为超过滤 将蛋白质溶液放在半透膜的袋内,置于流动的适当的缓冲液(如纯水)中,小分子杂质(如硫酸铵、氧化钠等)从袋中透出,而蛋白质保留于袋中从而将蛋白质纯化,这种方法称为透析 (三)透析 透析工作图 半透膜原理 带正电荷多蛋白紧密结合 带负电荷多蛋白流过层析柱 阳离子交换树脂工作示意图 分子筛层析 亲和层析工作示意图 蛋白质 载体介质 配体 结合 洗脱 洗脱介质 (六)超速离心 三、多肽链中氨基酸的顺序分析 第一步: 分离提纯蛋白质 ,测定NH2末端的数目,确定蛋白质分子是 由几条肽链构成的,并分离出 每条肽链。测定肽链的分子量,计算组成该肽链的氨基酸残基数。及每种
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