04【参考】放免基本原理课稿.pptVIP

放射免疫分析 临床免疫教研室 鲍会静 Kris_10713@126.com放射免疫分析的基本原理 Content 放射免疫分析基本原理 放射免疫分析概述 竞争性分析的基本原理 非竞争性分析的基本原理 两种分析方法的比较 放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）， 简称放免或放免法，是一种在无须采用生物测定方法的情况下用于检测抗原的实验室测定方法，体外实验。 Solomon Aaron Berson and Rosalyn Sussman Yalow Rosalyn Sussman Yalow insulin RIA 放射免疫分析概述 RIA检测技术可以达到10-9~10-12 放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）， 广义范围：RIA CPBA RRA IRMA… 分析原理分类：竞争性免疫分析 非竞争性免疫分析 放射免疫分析概述 竞争性免疫分析基本原理---RIA 如果标记抗原与非标记抗原对同一抗体有相同的亲和力，则二者在同一反应系统中就会发生与特异抗体的竞争性结合。 竞争性分析的基本原理 Ag + Ag* + Ab ---------→ Ag*-Ab (标记抗原-抗体复合物) ↓↑ Ag-Ab (非标记抗原-抗体复合物) 1 Ag和Ag* 同时存在，并均可与Ab 反应 2 Ag*+ Ag Ab的结合位点 Ag* 或是Ag 竞争性免疫分析基本原理---RIA 竞争性分析的基本原理 Ag + Ag* + Ab ---------→ Ag*-Ab (标记抗原-抗体复合物) ↓↑ Ag-Ab (非标记抗原-抗体复合物) 1 Ag的量与可以测量的Ag* +Ab的量形成某种函数关系 2 有关于Ag的量的剂量曲线 3 获得Ag的未知浓度 竞争性免疫分析剂量反应曲线 基于抗原抗体反应 遵循质量守恒原则 反应物与产物之间是动态平衡关系 质量作用定量：(law of mass action) 反应的反应速率与各反应物的浓度的幂的乘积成正比，其中各反应物的浓度的幂的指数即为元反应方程式中该反应物化学计量数的绝对值 竞争性分析的基本原理 NO2+CO=CO2+NO r=k[NO2][CO] 式中r为反应速率， [NO2]、[ CO]分别为反应物NO2和CO的浓度，k称为反应的速率常数。 根据质量作用定律，该反应的级数与反应的分子数是相等的。 竞争性免疫分析剂量反应曲线 Yalow and Berson 推导 竞争性分析的基本原理 k1 [Ag] + [Ab]===== [Ag-Ab] k2 F B 则： K = k1 / k2 = [Ag-Ab] / [Ag] [Ab] = B / F{[Ab0]一B} 移项： B / F = K{[Ab0]一B} F = 未结合抗原的摩尔浓度； B = 结合抗原(或抗体)的摩尔浓度 K = 平衡常数； [Ab0] = 抗体位点的初始摩尔浓度 = [Ab] + [Ag-Ab] 如上式，B / F与B之间应为线性函数关系 竞争性免疫分析剂量反应曲线 Ekins 推导 竞争性分析的基本原理 设：[p] = 标记物加待测物的初始浓度； [q] = 特异性结合物的初始浓度； B = 根据放射性测量算得的结合百分率;F = 根据放射性测量算得的游离百分率 R = B / F B+F=1 根据质量作用定律： k1 [Ag] + [Ab]===== [Ag-Ab]