不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验.doc

不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验 （哈尔滨中科生物工程有限公司 赵前） 免疫调节剂是用于调节和控制免疫功能的药物，包括免疫抑制剂和免疫增强剂。免疫增强剂是一类单独使用或与抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质，可增强机体的 免疫功能，缓解由环境造成的免疫功能紊乱，有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。目前在临床上常用的免疫增强剂有黄芪多糖、卡介苗、盐酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白细胞介素-2（白介素-2）等。本试验选用黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC作为免疫增强剂，以探明不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫免疫效果的影响。 1 材料与方法 1.1 试验动物 1 日龄健康海兰褐蛋鸡，购于泰安东岳种禽有限公司。 1.2 试验材料 96 孔V 型微量反应板、移液器、生理盐水、1%鸡红细胞悬液。 新城疫血凝抑制试验抗原由中国科学院提供；鸡新城疫灭活疫苗（La Sota 株）购于乾元浩生物股份有限公司。 黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康养殖工程中心提供。 RPMI 1640 培养液（Gibco 公司）；CKK-8、刀豆蛋白A（ConA，Sigma公司）。 小牛血清、Hank′s液、台酚兰、肝素钠。 1.3 试验动物的处理 600 只健康海兰褐蛋鸡随机分为A、B、C、D、E 5 组，每组120 只。试验在相同的环境下，采用同种饲料进行饲喂和同一防疫程序进行免疫预防。50 日龄防疫新城疫Ⅳ系和新城疫灭活疫苗时，免疫增强剂在防疫前后（48~52 日龄）连用5 d。A 组使用预防量的黄芪多糖粉剂，B 组盐酸左旋咪唑10 mg/kg 拌料，每天早晚各一次，C 组VE 80 mg/kg 拌料，D 组VC 100 mg/kg 拌料，E 组不加免疫增强剂，作为对照组。 1.4 抗体水平检测 分别于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每组随机抽样15 只鸡翅静脉采血，分离血清，采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）（《高致病性禽流感诊断技术》中华人民共和国国家标准GB/T 18936-2003）检测抗体效价，计算每组平均值，结果以log2表示。 1.5 ConA诱导的鸡血液T淋巴细胞转化试验 分别于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每组随机抽取15 只鸡翅静脉采取抗凝血，将1.5 mL 抗凝血与1.5 mL 细胞培养液（1640，不含胎牛血清）混匀；在灭菌离心管中加入3 mL 淋巴细胞分离液，并将3 mL 混匀血液轻轻的平铺在淋巴细胞分离液表面，1 500 r/min 离心20 min；将离心分层的淋巴细胞吸出，转到1.5 mL 离心管中，加入细胞培养液（1640，不含胎牛血清）重悬，3 000 r/min 洗涤两次；将淋巴细胞悬浮于1640 细胞培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为1×107个/mL。将调整好的细胞悬液加入96 孔细胞培养板，每孔加99 μL，然后实验组加入1 μL ConA（终浓度为10 μg/mL），对照组加入1 μL 细胞培养液（1640，含胎牛血清），空白对照加入100 μL 细胞培养液（1640，含胎牛血清）。每个样品作两个平行。将铺好的96 孔细胞培养板放入5%CO2，37 ℃培养箱中培养48 h；每孔加入终浓度10 μL CCK-8，放入二氧化碳培养箱，孵育1 h 后用酶标仪（OD450）读数，并计算刺激值。 2 结果 2.1 不同免疫增强剂对新城疫抗体水平的影响 不同日龄雏鸡新城疫（ND）抗体水平结果见图1。 图1 不同日龄雏鸡新城疫抗体水平结果（log2） 由图1 可知，试验A、B、C、D 组对ND 体液免疫水平的提高均有一定的效果。从70 日龄前抗体提升的速度及达到的峰值水平上来看，A 组、B组、D 组更具有优势，且A 组整体抗体水平消减曲线走势较好。 由于各试验组ND 基础抗体水平不同，所以对免疫后抗体滴度增加值进行了比较。 由图2 可以清楚看出，各组免疫增强剂对ND 体液免疫都有一定的作用，免疫后1 周内效果比较明显，A、B、D 组与E 组差异显著（P0.05），免后14 d D组与E组差异显著（P0.05），免后21、28、35 d各组差异不显著（P0.05）。 图2 免疫后不同日龄抗体水平与免疫前抗体水平的差值比较 2.2 不同免疫增强剂对新城疫疫苗T 淋巴细胞转化率的影响 不同免疫增强剂对新城疫疫苗T 淋巴细胞转化率的影响见图3，由图3 可以看出试验A、B、C、D、E组与对照组相比，均具有提高T淋巴细胞转化能力和提高