15-色谱法范例.pptVIP

二、高效液相色谱法（HPLC） 1.高效液相色谱仪的主要特点 ?与经典液相色谱相比： 分离效能高（40000~60000块塔板/米），分离速度快、色谱柱可反复使用，能在线检测。 ?与气相色谱相比： 优点：高压(104kPa)、高速(1h)、高效、高灵敏度(10-9-10-11g样品量)、几乎可分析各种物质，适用于热不稳定物质的分析； 缺点：没有灵敏度很高的通用检测器，操作运行不容易。 高效液相色谱仪构造 输液泵种类：恒压型和恒流型。 恒压泵可迅速获得高压，适于柱的匀浆填充。但因泵腔体积大，在往复推动时，会引起脉动，且输出流量随色谱系统阻力（主要是柱填充物）变化而变化，现已较少使用。 恒流型:溶剂流量恒定，与柱填充情况无关，使用较多。有机械注射式和机械往复式两种。应用最多的是机械往复式恒流泵。 4）梯度淋洗装置：在分离过程中逐渐改变流动相组成的装置。如果只有一个泵，可采用低压混合设计（将两种或以上的溶剂按一定比例混合，再由高压泵输出）；如果有两个或以上泵，调节各自的流量，可在高压下混合。 4）化学稳定性好；5）适宜的粘度。粘度过高，柱压增加；过低，易产生气泡。 在研究制定一个HPLC方法时，选择适宜的流动相是很重要的内容，下图是选择流动相中溶剂的三角形图。 二、固定相载体 由于各种HPLC分离方法的流动相均为液体，因此，HPLC通