两种芦荟多糖的分析方法比较两种芦荟多糖的分析方法比较.doc

学年论文 （课程论文、课程设计） 题 目： 两种芦荟多糖分析方法的比较 姓 名： 学 号： 专业年级： 成 绩： 指导教师（职称）： 两种芦荟多糖分析方法的比较 摘要：目的：通过比较两种芦荟多糖的分析方法，明确两种方法适合的范围。目前芦荟多糖的提取方法多数为水提——醇沉淀法，但是对于水提——醇沉法，又有多种分析芦荟多糖的方法。为寻找比较简单易行的芦荟多糖提取工艺，本文主要比较了两种常见的分析方法蒽酮—硫酸法和苯酚—硫酸法，对这两种方法中的仪器和材料、实验方法及过程复杂程度、效率这三个部分进行比较。通过比较得出，利用苯酚—硫酸法分析多糖适合小型研究和实验室使用。而蒽酮—硫酸法分析多糖用于工厂生产。 关键词：芦荟多糖；分析方法；蒽酮——硫酸分析法；苯酚——硫酸分析法 自古以来，芦荟作为一种天然的药用植物在民间就得到广泛的应用[1]。它被用于治疗便秘、烧伤、烫伤等多种疾病，同时具有安全、有效、易用等突出特点[2]。芦荟是属多年生肉质本草植物，具有生命力强、药用价值高等特点[3]。早在唐代，中国的《本草拾遗》就简略记载了芦荟的药用价值[4]。随着科学技术的发展，现代大量研究进一步证明芦荟具有抗菌消炎、抗溃疡、抗癌、促进伤口愈合、抗肿瘤、保健美容等作用[5] 。其性味苦，寒，入肝、心、脾经，可清热、通便、杀虫、治热结便秘、妇女闭经、癣疮等疾病[6]。芦荟中的化学成分复杂，目前已知的主要有蒽醌类化合物、蛋白质、矿物质、多糖等[7]。芦荟多糖是一大类分子化合物，一般是由葡萄糖以及葡萄糖聚合物组成，占芦荟的0.05%—3%[8]。随着糖类生化技术和免疫学研究的发展，人们对芦荟多糖有了越来越多的认识。 尽管芦荟药用价值很高，但是近年来的多数研究主要是集中在芦荟多糖的药效上，并没有深入而细致的开展关于其提取工艺的方法研究，我国芦荟产业的发展也受到一定的制约[9]。本实验是在一般芦荟多糖的水提——醇沉淀法提取工艺的基础上，对芦荟多糖分离提纯后的分析方法蒽酮—硫酸法和苯酚—硫酸法这两种方法的探讨，比较两种方法的材料需要和效率，分析提取芦荟多糖的最佳的提取方法，进一步明确芦荟多糖分析方法蒽酮—硫酸法和苯酚—硫酸法实用的范围，区别和明确实验室和工厂生产适合的提取方法。 1方法一：苯酚—硫酸法 1.2 材料与仪器 “日历高冷却离心机（himacR22E）；热重分析仪（STA 409C）；旋转蒸发仪（R-134）；酸度计；榨汁机；7530紫外分光光度计；BS110S电子分析天平；1000r/min高速自控组织捣碎机。 无水乙醇；浓硫酸；丙酮；去离子水；苯酚；乙醚；D-甘露糖；试剂均为分析纯。 1.3 实验方法 1.3.1 标准曲线绘制 精密称取105℃干燥至恒重的甘露糖0.100g于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容。用移液管精密移取5ml置于50mL容量瓶中，加蒸馏水定容。分别精密移取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水定容。然后分别精密吸取2ml于试管中，加1mL苯酚摇匀，加5mL浓硫酸迅速摇匀后，静置5分钟，后用沸水浴15分钟加热，冷却至室温，用分光光度法于波长为490nm处测吸收光度。得出结果列表显示，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，计算得出回归方程[10]。 1.3.2 芦荟多糖的提取 采用水提——醇沉法提取芦荟多糖苯酚——硫酸法进行分析。取芦荟叶片洗净、去刺。在去离子水中浸泡，除去表皮渗出的黄色液汁。然后切去表皮，将内层凝胶至于离心水中浸洗，捣碎，纱布过滤，次日离心，抽滤，所得芦荟汁经浓缩后，再次离心，以除尽纤维质，冷藏备用。然后向芦荟凝胶浓缩汁加入无水乙醇，使其乙醇终浓度为80%，沉淀12h后，高速离心得多糖沉淀。取沉淀物溶于蒸馏水中配成溶液，过滤，摇匀，定容至250ml容量瓶中，既得芦荟多糖溶液。 1.3.3 总糖含量测定 精密量取芦荟粗多糖溶液5mL置于50mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，从中精密吸取2mL置于试管中，照1.3.1项下自加苯酚起以此操作，测得吸收度依回归方程计算，再乘上稀释倍数，得芦荟多糖相对含量”[11]。 1.3.4 精密度试验 平行取六份甘露糖和芦荟多糖溶液，苯酚-硫酸法显色后测定D值。 1.3.5 回收实验 加样回收率试验取芦荟多糖提取液5份,分别加入一定量的甘露糖标准液,进行回收试验。 2 方法二：蒽酮—硫酸法 2.1 材料与仪器 芦