KIAA1915调控雌激素受全Erα介导的转录.docVIP

中国医科大学 硕士学位论文 KIAA1915调控雌激素受全Erα介导的转录 姓名：孙洪邈 申请学位级别：硕士 专业：细胞生物学 指导教师：赵越 201104  ???? 蝇中筛选出候选因子???， 果蝇???基因的人同源基因 ?．??疜?? ? ??荆籏????蛔B嫉骺兀籗??籗??  ????????伐—·???? ? ? ??? ? ???? ????????? ?????? ?? ????琣? ? ?????? ? ????；? ? ? ??? ????? ??? ? ???????瑆?? ? ?? ?—????? ? ??? ? ??? ???． ?? ????? ???，? ? ? ???狣?／????? ??? ??／?????，?? ??琒?? ????? ??????，?? ? ?????．?????? ? ??????? ????琲? ?? ? ? ?? ?  ? ????? ?? ???????瑃? ?? ? ? ???? ????? ?? ?—???????????? ??． ????琒??  ? ??? 》?ǜ刍??蚢 ?哥?甀 ?瞿鋜 ? ???? ??? ?  ．．十十麟 ?， ? 图?琀?泛索化影响转录的机制  ????琔??与???呈鬠?????????? 口晰∞?嘲曩 — — — — — — — — — — — — — — — — — — — 一 ～ ? ? ：·一?．?? ‘??鬣?爵鎩 ?Ю? ／?趑耷蛃蜘鬯 。 ‘ 。 ‘ ‘ ’ ～ ， ?弧#蹺鼬???????? ㈣到 、 一 一 ㈡荭一 ， 图???蠩?介导的基因转录系统的果蝇模型 ?  机制进行了进一步研究。 一、实验材料 ????骸綿???????】 ???细胞?赴??镅?笛槭冶４娴南赴? ??蟪Ω司??甤?????赴??镅?笛槭冶４婢?? ??÷笈哐溃篍??伊贝莱广州森保伊钡莱生物科技有限公司。 ????．??成都人民面粉厂。 ?瓽???：天津市标准科技有限公司。 ??。 ?瓹???? ?? ?  其他常用试剂配制： ??? ????，???，???，?????? ??????；蛋白电泳缓冲液： ????蚈．???。 ??⑿屠胄幕?築??? ??迨酉晕⒕担篛???璖? ? ?．电泳仪??—?? ?  ?．聚丙烯酞胺凝胶电泳系统?拦鶥?—???? ?．空气恒温摇床?虾Ｐ旅缫搅破餍倒?? ??果蝇培养基的制作 ??谱鞅壤??读? 名称 用量 ??芛?? ?????的??放入锅内 ?  ???÷笈哐浚?衩酌妫珿???，??倒入锅中，搅匀。 ??调至?。??中????? ??调至??． ??加入???的丙酸 ??第二天，用绵塞把培养基的瓶塞好。 ??果蝇的传代培养 ??果蝇的杂交 似确圆形，较嘭大，末端尖妒 似圆筒状，末端钝圆一 腹部背面≯ ?  眼盘实验。 ??果蝇眼盘实验 ?甈??????用于解剖果蝇幼虫，可做为洗液。 ??％?的配制：?％?????％?????????份 ???∠碌墓??凡糠湃?％?中，冰上固定?分钟。 ?甈??????洗?危?看?分钟 ???????．?血清 ??弦豢???过夜?甗???一???】 ??．?／? ?．荧光共聚焦显微镜观察。 ??质粒的扩增  ??尤?? ??科桨?相关抗性的?固体培养基???疌温箱培养?～?小时 ??４婢?郑???菌液??? ? ?的相关抗性的?培养基 ?????，快速颠倒两次，然后置于冰上。 ⑥用??? ?胖?分钟，??放置?分钟。 ?  ??胄?分钟，重复几次至上清全部移入柱子。 ????，?? ??胄?分钟，弃管中液 ??胄?分钟，重复一次。 ??胄?分钟，换新管，加?。?と鹊腅??? ??胄?分钟，重复上述 ??? ??细胞培养 哺乳动物肺癌??细胞，工具细胞???的培养 ? ?? ? ? ?  ??免疫沉淀实验 直接加入培养皿中，前后轻轻晃动混匀。 ??肞?洗三次 ???????孟赴?谓?赴?诠蜗潞螅??，?? ???? ?????蛋白酶抑制剂重悬细胞，涡旋直至无块状物，冰 上孵育??????注射器反复抽吸?次?灰F鹌??，?妫?胄??? ? ????锨錶转移至一个新管中。 ?????蠸?．??电泳。 ???????分析 将上述蛋白经?％??甈???悍掷耄?懔髯R浦罰??ど希??过夜， 用?ネ阎?谭鄯獗?．?，??洗膜? ???尤胂嘤?固澹??过夜，?? 洗膜? ???尤肜备??趸?锩副昙堑亩??????，室温下轻摇?， ??????珽?显色，压片。 ?  ．?：??郾??０放ǘ?％ ?．? ?％????????????? ??? ?％： ? ??