20150504文献汇报赖方秾例析.pptVIP

2013年短板分析 ACQUITY UPLC BEH column (C 18 , 2.1 × 100 mm, 1.7 μm) 柱温：50℃ 流动相A：0.1%（v/v）甲酸，水溶液 流动相B：0.1%（v/v）甲酸，甲醇溶液 流速：0.36-0.40mL/min TOF-MS： 2013年短板分析 步骤 准备血清和血浆样品（2-3h） 1.4℃冰上融解血清血浆样品30-60分钟。 2.将其中一份400uL的血清/血浆样品加入2mL离心管内，并加入200uL IS2溶液和1200uL甲醇溶液。 3.Vortex 15s彻底混匀，15800g室温离心15分钟。 4.转移出370uL至一个新的2mL离心管，在真空离心蒸发器内干燥18小时，干燥过程不要加热。 此后样品可在4℃储存长达12周 2013年短板分析 步骤 准备QC样品（2-3h） 5.4℃冰上融解血清血浆样品30-60分钟。 6.将其中一份400uL的血清/血浆样品加入2mL离心管内，并加入200uL IS2溶液和1200uL甲醇溶液。 7.Vortex 15s彻底混匀，15800g室温离心15分钟。 8.转移出370uL至一个新的2mL离心管，在真空离心蒸发器内干燥18小时，干燥过程不要加热。 此后样品可在4℃储存长达12周 2013年短板分析 步骤 准备含盐样品空白对照（15min） 9.将100uL 0.7%（w/v）的氯化钠加入2mL离心管加入50uL内标溶液和300uL甲醇 10.Vortex 15s彻底混匀，在真空离心蒸发器内干燥18小时，干燥过程不要加热。 此后样品可在4℃储存长达12周 2013年短板分析 步骤 准备色谱检测溶液（15min） 11.精确秤取月桂酰氨，苯甲酰基亮氨酸，11?-脱氧皮质酮，皮质醇， 表睾酮和甲状腺素，苯甲酰基-D-苯丙氨酸10mg放入15mL离心管，溶于10mL甲醇：水（1:1）溶液中，标记为CCS1（浓度为1.0mg/mL） 12.将2mL等份的CCS1溶液加入15mL离心管，并加入8mL甲醇：水（1:1）溶液中，标记为CCS2（浓度为200ug/mL） 此后样品可在4℃储存2周 2013年短板分析 步骤 样品用于GC-MS分析的化学衍生方法（45-60min） 13.将样品冻干1h，开启加热至80℃。 14.向干燥管中加入50uL 浓度为 20mg/mL O-methoxylamine 吡啶溶液，vortex 15s充分混匀，开启加热至80℃，15min。 15.从加热板上移去样品，向各样品加入50uL MSTFA，vortex 15s，开启加热至80℃，15min。 16.从加热板上移去样品，冷却5min。向每个样品中加入RI2溶液，vortex 15s。 17.各样品15800g离心15min，将100uL上清液加入之200uL管内并套至2mL离心管中，封口。 2013年短板分析 2013年短板分析 步骤 GC-TOF-MS分析（30分钟每个样品） 18.按照如下仪器参数分析样品。将1uL样品注入分流或不分流的进样口（进样口温度280℃），分流比4：1，氦气作为载气流动速率为1mL/min。 19.按照预设顺序分析样品。 20.分析完每个样品盘后，评价六种代谢物（乳酸，丙氨酸，谷氨酸，果糖，色氨酸，硬脂酸）。保证峰型，峰高，保留时间，重现性等没有产生系统性的偏移。 * 1 背景介绍 2013年短板分析 2 技术路线 3 研究方法 4 总结 背景介绍 ?the quantitative measurement of the dynamic multiparametric metabolic response of living systems to pathophysiological stimuli or genetic modification. Metabonomics： Metabolomics（代谢物组学）： systematic study of the unique chemical fingerprints that specific cellular processes leave behind “定量测定生物系统对生理和病理刺激以及基因改变的动态、多参数代谢应答” “系统的研究特殊的细胞过程背后独特的化学标志物” 2013年短板分析 背景介绍 背景介绍 2013年短板分析 背景介绍 背景介绍 2013年短板分析 GC-MS HPLC-MS 背景介绍 2013年短板分析 UPLC-QTOF（Brucker） UHPLC-Oribtrip（Thermo） UPLC-QTOF（Waters） IT-TOF （Shimadzu, Japan） 背景介绍 2013年短板分析 RRLC Q