第十章细胞培养..docVIP

第章 细胞培养 目的要求： 教学难点、重点： 第一节 单细胞培养 一、单细胞的分离 愈伤组织诱导 不同的植物彩用不同的方法用不同的外植体诱导形成愈伤组织。愈伤组织反复继代，使组织不断增殖，提高愈伤组织的松散性。 单细胞悬浮液的制备 将愈伤组织在液体培养基中培养，建立悬浮培养物，进而通过振荡培养，使愈伤组织形成细胞团，小细胞团甚至是单细胞分散培养物，再进一步通过细胞筛过筛得到单细胞悬液。 二、单细胞培养的方法 （）平板培养法 是将单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合后平铺一薄层在培养皿底上的培养方法。该方法是Bergmann(1960年)首创。用于分离单细胞无性系，研究其生理、生化、遗传上的差异而设计的一种单细胞培养技术。广泛应用于细胞、原生质体及融合产物的培养。该法的特点为：可以定点观察；分离单细胞系容易；但培养细胞气体交换不畅。平板培养的基本技术： 1）单细胞悬浮液的制备 2悬浮细胞密度的调制 平板培养要求最初细胞密度（即初始植板密度）为1×10 3～100×10 3 个/ml 。 初始植板密度：单细胞固体平板培养时，细胞悬浮液接种到琼脂培养基上最初细胞密度。 若悬浮液与培养基以1:4混合，则应把悬浮液的细胞密度调到 5×10 3- 500×10 3 个/ml。 3）琼脂培养基配制 1.4%琼脂基本培养基+等量细胞培养液 = 0.7 %琼脂条件培养基。 4）平板制作 细