消光系数1.ppt

消光系数 【英】extinction coeffic 【单位】1/m 消光系数是被测溶液对光的吸收大小值。 被测溶液浓度高，溶液显色后颜色深，对光吸收大，光透射率低，反之就小。 紫外吸收法是测定蛋白质溶液浓度最为常用的方法，而已知蛋白质的消光系数是用紫外吸收法准确测定蛋白质溶液浓度的前提条件。 紫外吸收法测蛋白质的含量 蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定。 紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。低浓度的盐，例如生化制备中常用的（NH4）2SO4等和数缓冲液不干扰测定。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值。 此法的特点： 准确度较差，干扰物质多(如嘌呤、嘧啶及核酸等)，该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。 此外，进行紫外吸收法测定时，由于蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有变化，因此要注意溶液的pH值，测定样品时的pH要与测定标准曲线的pH相一致。 1. 280nm的光吸收法 因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收，且各种蛋白质的三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。 　　 测定时，将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中，用配制蛋白质溶液的溶剂（水或缓冲液）作空白对照，在紫外分光度计上直接读取280 nm的吸光度值A280。蛋白质浓度可控制在0.1-1.0mg/ml左右。通常用1cm光径的标准石英比色皿，盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时，A280约为1.0左右。由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。 许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值（A1％1cm），即消光系数。有文献数据可查，根据此光吸收值可以较准确地计算蛋白质浓度。下式列出了蛋白质浓度与（A1％1cm）值（即蛋白质溶液浓度为1%，光径为1cm时的光吸收值）的关系。文献值A1％1cm,λ称为百分吸收系数或比吸收系数。 　　蛋白质浓度 = (A280′10 )/ A1％1cm,280nm (mg/ml) 　　(Q 1%浓度?10mg/ml) G:\消光系数与紫外分光光度法测定蛋白质含量\用碱水解的方法测定蛋白质的消光系数.pdf * * * 消光系数与紫外吸收法测蛋白质含量 谢谢观赏 WPS Office Make Presentation much more fun @WPS官方微博 @kingsoftwps * *