微生物实验培养 检测 保存课件.ppt

霉菌的实验材料 （1）培养基制备的一般程序 注意 实验室常用培养基 肉膏蛋白胨培养基： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15-20g，水1000ml，pH7.0-7.2； 淀粉琼脂培养基（高氏1号培养基）： 可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO40.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水1000ml，pH7.0-7.2; PDA培养基： 马铃薯（去皮）200g，蔗糖或葡萄糖15g，琼脂15-20g，水1000ml; 实验原理 半固体培养基：穿刺接种 液体培养基接种 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜面划线接种 浅盘固体接种 划线接种注意要点 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后接种环应灭菌. 真菌分离、纯化 利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁涉生长。 一般采用PDA培养基 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。 将分离得到的单菌落分别接种到单个平板上 菌落观察 霉菌 放线菌 要求：每种微生物选择典型菌落1-2个，列表描述细菌、霉菌、酵母、放线菌的菌落形态特征 （4）菌种保藏 最常见的保藏方法：斜面 细菌的保藏：甘油保藏 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏 几种常用菌种保藏方法的比较 1．比浊计数法 浊——细菌悬浮液的浊度 2. 酵母的血球计数板计数 酵母菌悬液 显微镜、血球计数板、分光光度计等。 1．了解血球计数板构造 显微镜下找到血球计数板的各种格子 2、目测酵母菌大致浓度。 3、稀释酵母菌悬液，直至其个数在计数范围内：每小格2-5个。 4、计算出酵母浓度，同时采用分光光度计测定其OD。 5、将原酵母菌液稀释至5-7个梯度，分别测定其浓度。 以OD值为横坐标，浓度为纵坐标，做标准曲线。 霉菌形态及培养方法 1培养基的选择 目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。 霉菌菌落 有菌丝,可在显微镜下观察到 孢子 菌丝均可繁殖 水浸片制作 视频 讨论 霉菌水饺引发速冻食品卫生标准问题/tv/2005-10-26/094511801.html 1培养基选择 有的菌株即使污染数量不多,但其产生的霉菌毒素却危害较大,因此仅作霉菌计数并不能全面反映其危害程度,重要的是要知道污染菌的菌相,才能更好地判断被污染食品的安全程度。为此,国外有些研究者设计出各类选择性培养基,可以识别产毒的霉菌。如AFPA培养基(配方:酵母提取汁20g,蛋白胨10g,柠檬酸铁铵0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH5.6)用于分离黄曲霉毒素产生菌高污染率的食品。 　2接种方式 2.1主要有倾注法和涂布法两种。目前国际方法中采用倾注法,但近来国际上有不少学者认为霉菌计数采用涂 2.2对霉菌计数来说,涂抹法有以下几方面优越于倾注法:①培养出的霉菌菌落数较多;②培养所需的时间较短;③霉菌孢子、菌落形态特征发育完全,便于鉴定。这是因为绝大多数霉菌是好氧的,在培养基表面生长快,发育好,而混在培养基中发育就受影响,而且在培养基倾注时霉菌孢子易受热损伤。布法更合适。 3培养温度 3.1大部分菌种的最适温度为25~30℃。 3.2若有特殊培养目的,则应适当调节培养温度 4培养时间 如果只要作霉菌计数,培养3~4天已基本达到目的,但如果还要进一步分类鉴定,则需要培养更长的时间(7~14天)。 5最适计数范围 5.1应尽量选择10~50个/平皿的稀释度进行霉菌计数。 5.2为控制霉菌的生长速度和菌落的生长范围,可在培养基中添加少量抗生素,如氯霉素(50~100mg/L),金霉素(20~100mg/L),庆大霉素(50mg/L),土霉素(100mg/L)等。 6霉菌检测过程中应特别注意的事项 6.1　由于霉菌检测所需的时间较长,中间又需要多次观察,因此实验前一定要作好实验计划,明确观察记录的时间。6.2　霉菌孢子通过空气传播,所以实验时应保持实验室平静,减少空气流通;操作时手脚要快,动作要轻,特别是培养过程中,如果观察时动作过大,早期生长出的霉菌孢子就会在培养基内扩散,形成新的菌落,导致结果不准确。6.3实验前应认真做好全面的消毒