2014全国会议结石组发言导论.pptVIP

p38MAPK信号通路在草酸钙肾结石形成中的作用研究 湖北省中医院泌尿外科 曾令启 p38MAPK信号通路概述 丝裂原激活蛋白激酶（ MAPK，mitogen-activated protein kinase）是哺乳动物广泛表达的苏氨酸/络氨酸激酶，具有双重磷酸化能力 ERK，JNK，P38MAPK 主要功能：传递信号（细胞外 细胞内） 应激刺激（UV、H2O2、热休克、缺氧等）、炎性因子（TNF-α、IL-1、IL-18 、FGF等 ）、LPS、G﹢细胞壁成分 p38激活 诱导保护蛋白质合成 细胞周期（生长、凋亡、分化） 四种亚型：α、β、γ、δ p38MAPKα、β：几乎在所有的组织中均有表达，调节细胞基本的生命活动，并且在应激反应中起主要作用 p38MAPKγ：肺、胰腺、肾脏、睾丸和表皮组织 p38MAPKδ：骨骼肌、心脏和胸腺中含量丰富，控细胞的糖代谢。 p38MAPK通路阻断：吡咯咪唑类化合物， SB206718、SB220025、SB202190、SB203580、 B239063、VKl99等 p38MAPK与疾病： 炎症（类风湿性关节炎、哮喘、）；心血管疾病（心肌细胞功能障碍，缺血再灌注损）；肿瘤；神经退行性疾病（ Alzheimer’s disease、Huntington’s disease、 Parkinson’S disease、multiple sclerosis、 amyotrophic lateral sclerosis ）；糖尿病；眼部疾病；急性肺水肿；疼痛（前列腺炎等）。 经Ras蛋白活化丝裂原蛋白激酶 应激因子 细胞G0转入G1期 活化受体TPK 调节mRNA转录和翻译 Ras—GDP Ras—GTP(有活性) 活化Raf(具MAPKKK活性) 催化c-jun,c-fos,c-myc磷酸化 MAPKK磷酸化 MAPK磷酸化 COM结晶与肾小管上皮细胞相互作用 细胞损伤：产生ROS、诱发脂质过氧化及炎症因子（IL-6、MPC-1） 晶体粘附和滞留：通过大分子物质之间的识别迅速而牢固地粘附于上皮细胞膜发生滞留启动结石形成的级联反应 细胞摄入晶体：肾小管上皮细胞主动摄入晶体 细胞内事件：一些细胞死亡，一些细胞基因激活而增殖，或促进细胞产生大分子物质来调节结石的形成 细胞间质钙化：加剧细胞毒性，诱发炎症和坏死 COM结晶激活p38MAPK信号通路的研究 目的：探索草酸钙肾结石形成过程中p38MAPK的作用 实验方法 人肾小管上皮细胞（HK-2细胞） 细胞在各个时间点（0~30min）暴露于一水草酸（COM）结晶（20μg/cm2 ） 暴露于DMEM作为阴性对照，暴露于茴香霉素（10μg/ml）30min作为阳性对照 Western Blot检测磷酸化p38MAPK和总p38MAPK（磷酸化/去磷酸化）的活性 观察通过使用肝素特异性地抑制COM结晶与HK-2细胞的结合而阻滞p38MAPK的激活 观察通过使用SB203580对p38MAPK特异性的抑制而消除COM结晶诱导的DNA合成 结 果 一、COM结晶诱导p38MAPK的活性： 1.细胞暴露于COM结晶逐渐诱导磷酸化p38MAPK的免疫活性，p38MAPK的最大激活发生在COM