清肾颗粒质量标准研究.docVIP

描述：目的 建立清肾颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对大黄、白花蛇舌草、黄连进行定性鉴别。采用高效液相色谱法测定大黄中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量，Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 ... 　　摘要：目的 建立清肾颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对大黄、白花蛇舌草、黄连进行定性鉴别。采用高效液相色谱法测定大黄中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量，Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），甲醇-0.1%磷酸（70∶30）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长245 nm，柱温30 ℃。结果 薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰。大黄酸、大黄素、大黄酚分别在0.003 3～0.42 μg、0.008 0～0.51 μg、0.009 9～0.32 μg范围内与峰面积的线性关系良好，相关系数分别为0.999 9、1.000 0、1.000 0，平均回收率分别为98.84%（RSD=1.30%，n=6）、99.04%（RSD=1.34%，n=6）、100.35% （RSD=1.89%，n=6）。结论 本定性定量检测方法准确、快速，可用于清肾颗粒的质量控制。　　清肾颗粒由大黄、白花蛇舌草、黄连等14味中药组成，具有清热化湿、祛瘀泄浊的功效，临床用于慢性肾功能衰竭湿热证的治疗，为安徽中医药大学第一附属医院的院内制剂。其中大黄为君药，白花蛇舌草、黄连均为臣药且用量较大。大黄的主要活性成分为大黄酸、大黄素、大黄酚等蒽醌类成分，故采用高效液相色谱法（HPLC）对清肾颗粒中大 黄含有的大黄酸、大黄素、大黄酚进行含量测定，并对其进行方法学验证。采用薄层色谱法对清肾颗粒中的大黄、白花蛇舌草、黄连进行薄层色谱鉴别，建立清肾颗 粒的质量标准。　　1 仪器与试药　　KX-30DE型数控超声波清洗器，岛津LC-20AT高效液相色谱仪。　　大黄酸对照品（批号110757-200206）、大黄素对照品（批号110758-200110）、大黄酚对照品（批号04-2001）、 大黄对照药材（批号121249）、盐酸小檗碱（批号110713-200609）、黄连对照药材（批号120913- 200609）、去乙酰车叶草酸甲酯（批号111786- 200801）、白花蛇舌草对照药材（批号121183-201003）均购自中国食品药品检定研究院。甲醇（色谱纯，美国Fisher公司），水为娃哈 哈纯净水，其他试剂均为分析纯。清肾颗粒（由安徽中医药大学第一附属医院制剂中心提供，批号分别20120811、。试验用大黄、白花蛇舌草、黄连阴性对照，采用与清肾颗粒相同的工艺进行制备。　　2 定性鉴别　　2.1 大黄　　取本品5 g，研细，加甲醇20 mL，浸渍1 h，滤过，取续滤液5 mL，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加入盐酸1 mL，水浴30 min，取出，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，用三氯甲烷定容到2 mL容量瓶，作为供试品溶液。取大黄阴性对照样品5 g，同法制成阴性对照溶液。另取大黄对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。取大黄素、大黄酸2 mg，用甲醇溶解制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述5种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-98%甲酸（15∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰[2-3]。　　2.2 白花蛇舌草　　取本品10 g，研细，加甲醇50 mL，超声处理（功率300 W，频率24 kHz）30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取白花蛇舌草阴性对照样品，同法制备阴性对照溶液。另取白花蛇舌草对照药材1.5 g，加水50 mL，回流提取15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5 mL使溶解，作为对照药材溶液。取去乙酰车叶草酸甲酯2 mg，加甲醇使溶解，制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述4种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以氯仿-甲醇-水（5∶1.5∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸，于105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。　　2.3 黄连　　取本品5 g，研细，加甲醇-盐酸（100∶1）25 mL，超声处理（300 W，频率24 kH