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细胞免疫功能检测方法 ELISPOT的建立及应用 指导老师： 常维山教授 　　　　　　柴家前副教授 　　　　　 刘永庆教授 报告人：李梅 ELISPOT是什么？ ELISPOT ： 全名为酶联免疫斑点检测。 　它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术，能够在单细胞水平检测细胞因子等分泌物的分泌情况 原理可概括为：用抗体捕获培养中细胞所分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色方式将其表现出来（Sedgwick JD 2005）。 ELISPOT检测的优点 灵敏度高：在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。灵敏度高于ELISA 。 单细胞水平：ELISPOT 检测的是单个活细胞的分泌。 操作简便：不需专门的实验仪器设备。可按照标准化的实验操作，可以同时处理数百个样品（Kalyuzhny AE 2005）。 ELISPOT的流程 底板与捕捉抗体的包被 底板类型：硝酸纤维素膜板、PVDF膜板等 捕捉抗体：如抗某细胞因子抗体（Purified Rat Anti-Mouse IFN-r Monoclonal Antibody）。 抗体包被：用无菌PBS（PH9.6）来稀释包被抗体，包被量通常在1-2μg/mL（1.25ug/ml ）。 次日倾倒包被液，PB