细胞染色专题之一台盼蓝..docVIP

细胞染色专题之一：台盼蓝 台盼蓝（Trypan Blue，也称Direct blue 14）：一种死细胞染色用色素 化学名： 3,3-{[3,3-Dimethyl(1,1-biphenyl)-4,4-diyl]bis(azo)}bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]双(偶氮)}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸)，四钠盐分子式：C34H24N6Na4O14S4 分子量：960.81 CAS Number： 72-57-1 外观：黑褐色结晶粉末 摩尔吸光度：69,000(在606nm附近) 染色原理： 细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性， 通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试（dye exclusion），Erythrosin B(红色)、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。 溶于水，可以配制成10mg/ml的水溶液，水溶液呈深蓝色。 台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可。 应用于细胞凋亡： 如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的，此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。 储存条件：常温保存 注意事项： 1. 台盼蓝对人体有毒 2. 台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。 3. 台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说，还比较方便，对贴壁细胞来说，较为繁琐。因为要消化，有时，96孔板不一定能消化干净。而且，该法是测定细胞浓度的方法，与细胞悬液的体积有关，加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积。可以说，该法相对准确，可能有一些人为因素的干扰。 细胞染色专题之二：美蓝 美蓝 英文名：Methylene blue，Swiss blue 中文名：亚甲基蓝、次甲基蓝、品蓝、美蓝、亚甲蓝、四甲基蓝、盐基湖蓝、碱性亚甲天蓝等。 分子式：C16H18ClN3S 分子量：319.85 g/mol CAS Number：61-73-4 EINECS Number： 200-515-2 熔点：100 ℃ 沸点：分解 吸收峰：668nm和609nm。 染色原理： 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能 使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母 细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 细胞染色专题之三：吖啶橙 吖啶橙：N,N,N,N-tetramethylacridine-3,6-diamine 中文名：3,6-双(二甲基氨基)吖啶 英文名：Acridine Orange（ AO），Euchrysine，3,6-Acridinediamine，Waxoline Orange A，Acridine Orange Base，Solvent Orange 15，Rhoduline Orange，Rhoduline Orange N，Acridine Orange NO，Rhoduline Orange NO，Basic Orange分子式：C17H19N3 分子量：265.35 g/mol CAS number：10127-02-3 外观：橙色、红棕色粉末 染色原理： 吖啶橙（AO）与双链DNA形成发绿色荧光的复合物。AO还可与单链DAN或RNA形成发红色荧光 的复合物。一个AO分子嵌入双链DNA的三个碱基对并发出最大波长为526nm（激发502nm）的绿色荧光。一个AO分子与单链DNA或RNA的一个磷 酸基相互作用形成聚集或堆叠的结构，此结构发出最大波长为650nm（激发460nm）的红色荧光。因此，AO用于被利用来检测双链DNA和单链DNA或 RNA。它使得用氩激光激发器或流式细胞仪同时测定DNA和RNA成为可能。 光谱数据： 与DNA作用时和荧光素相似，激发最大波长502nm，发射最大525nm（绿光）。于RNA作用时，激发最大波长移动到460nm（蓝光），发射最大移