基因诊断2012课件.ppt

第10章 基因诊断 Contents 第一节 基因诊断概念、应用技术 第二节 基因诊断方法及实例 基因诊断： 利用分子生物学技术从DNA水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷，又称DNA分析法。 传统的疾病诊断：表现型→基因型 基因诊断：基因型→表现型（逆向诊断） 测序： dHPLC 筛查基因突变的方法比较 DNA分析中常用的遗传性多态性标记： 二、直接基因诊断及实例 直接检测致病基因本身的异常。通常使用基因本身或邻近DNA序列作为探针，进行Southern杂交，或通过PCR扩增产物（或酶切），以检测基因点突变、缺失、插入等异常性质。 主要适用于已知基因异常疾病的诊断。 Southern-RFLP 检测β地贫?地中海贫血→ ?珠蛋白基因部分缺失 三、间接基因诊断方法及实例 当致病基因虽然已知，但其异常性质未知时，或疾病Gene本身尚未知时，主要通过DNA多态的连锁分析间接地作出诊断。 连锁分析 应用条件：遗传标记与易感Gene在染色体上连锁 遗传标记：基因组DNA多态，如RFLP,VNTR,SNP等。 连锁分析过程： 1、首先确定家系中先症者致病基因与DNA多态等位片段间的连锁关系； 2、检测家系成员DNA多态性结果 3、分析待检者是否遗传到带有致病基因的染色体,间接推断 患病情况。 1 Southern blot--RFLP诊断(PKU) PAH基因两侧有Msp1酶切位点; 用该酶消化可产生23kb、19kb 两种等位片段; 以PAH cDNA为探针与PKU家系成员外周血DNA杂交 患者为19kb片段的纯合子,说明患者缺陷的PAH基因与19kb片段连锁 其父、母亲缺陷的PAH基因与19kb片段连锁，其23kb片段与正常PAH基因连锁。 II2为23kb和19kb片段的杂合子,为表型正常的致病基因携带者。 2 成年型多囊肾病的诊断 例：成年型多囊肾病——APKD，AD ，临床表现为腰痛，蛋白尿，血尿，高血压，肾盂性肾炎，肾结石。最终导致肾功能衰竭和尿毒症。 APKD——Gene定位16p13，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发病机理也尚未阐明，但已证实APKD Gene与α珠蛋白基因3’端附近的一段小卫星DNA序列（3’HVR）紧密连锁，因此，可以通过RFLP连锁分析进行诊断。 甲型血友病诊断（PCR—RFLP） II1→99bp→其母(I2)的99bp片段与缺陷基因连锁，142bp片段与正常基因连锁；其父(I3)→142bp片段与正常基因连锁 ∴II2为携带者； II3为正常. 结果分析 1）先症者II1具有99bp片段而发病，该片段来自母亲。 2）II2有142bp/99bp，为杂合子。142bp来自父亲，为正常片段，99bp片段是来自母亲而成为携带者。 3）Ⅲ1为99bp片段； 如果是男性为患者（99bp片段来自母亲）； 如果是女性为携带者（来自父母双方）。 PCR-VNTR 单体型分析 有时用一种酶和一个多态位点(RFLP,STR)不能提供可供分析的信息，需采用一种以上的酶结合几个多态信息分析。 采用同一条染色体上与疾病基因紧密连锁的多个位点的DNA多态片段的组合类型进行分析，该分析方法称单体型分析（Haplotyping) 分析： 患儿Ⅱ1从母亲和父亲各获得一个7.0kb突变型,从Hind Ⅲ 酶切结果看出：正常同胞Ⅱ3为纯合4.0kb,也是sphⅠ7.0kb纯合体,故母亲H4.0kb\S7.0kb 构成单体型，母亲7.0kb为突变型，因此，母亲H4.0kb\S7.0kb为突变单体型。 患儿Ⅱ1为HindⅢ 4.2/4.0kb杂合体，故父亲H 4.2kb S 7.0kb 为突变单体型； 母亲H4.2kb、S9.7kb和父亲H4.0kb、S7.0kb 为正常单体型。 Ⅱ2两个单体型分别为H4.2kb、S9.7kb（母）和H4.0kb、S 7.0kb（父）正常个体； Ⅱ3两个单体型分别为H 4.0kb S 7.0kb（母）和H4.0kb、S7.0kb（父）携带者。 基因诊断应用 1、临床诊断：在遗传病的临床症状出现后所作的诊断。如，新生儿筛查 1）一般手段：病史采集、症状、体征、常规的实验室检查。 2）特殊手段：系谱分析、核型分析、生化分析、DNA分析 2、症状前诊断：在遗传病的临床症状出现前所作的诊断。如，huntington舞蹈病 3、产前基因诊断：判断胎儿的染色体或基因等是否正常。 4、植入前基因诊断：胚胎是否遗传正常 产前基因诊断对象 1)夫妇之一有染色体畸变，特别是平衡易位携带者，或夫妇核型正常，但曾生育过染色体病患儿的孕妇； 2)35岁以上的高龄孕妇； 3)夫妇之一有先天性代谢缺陷、开放性神