基础生物化学核酸课件课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * 氨基酸臂构成叶柄，突环区好像三片叶子， 额外环(可变环)上，在不同分子中，核苷酸数目变化较大 * * * * * * * * * * * * * * * * * 比较直接测定生物大分子结构的衍射方法是X射线晶体衍射。但DNA分子太大，很难制得晶体。用针从浓的DNA溶液中抽出纤维，用于衍射研究。 * * 电位滴定法确定参与酸碱反应的基团性质 * * * * * * * * * 两个核苷酸之间的夹角是36 * * DNA的结构受环境条件的影响而改变。 * * * * * 肺炎双球菌是一种致病的细菌，毒性很强。包有一层多糖荚膜，固体培养基上培养得到光滑型菌落，简称S型， S型是致病菌。如果寄生在人体内，人就会患肺炎，如果不及时治疗，可能死亡。 1928年， Grifths发现了一个S型致病菌的变异菌株，没有多糖荚膜，菌落呈粗糙型，简称R型，无致病能力。 肺炎双球菌有两种类型：S型，它的细胞周围有一层厚厚多糖荚膜，固体培养基上培养得到光滑型菌落，属于有毒的类型。另一種R型，没有多糖荚膜，菌落呈粗糙型，简称R型，无致病能力。 * * * * * 无毒性的R型活细菌与加热杀死的S细菌混合后注射到鼠体内，鼠死亡，并且从鼠体内分离出有毒性的S型活细菌，其后代也有毒性。 说明无毒性的R型活细菌与加热杀死的S型细菌混合后，可转化成有毒性的S型活细菌，并且这种转化的性状可以遗传。 * * * * * 之后美国科学家艾弗里和他的同事对这一问题进行了深入研究。他们认为要弄清楚转化因子，就要对S型细菌中的物质提取、分离和鉴定。他们从S型活细菌中提取出了DNA、蛋白质和多糖等物质，然后将它们分别加入已培养了R型细菌的培养基中，发现只有加入S型细菌的DNA才具有转化的功能。 * * * * * * * -质粒-原核生物 低等真核生物酵母中也存在-质粒 * * * * * * * * 6‘ NH2 2’ 6‘ NH2 O 2’ 4‘ O NH2 2’，4‘ O O 2’，4‘，5’ O O CH3 * * * * * 紫外法测定核酸含量的理论基础（260nm） 核酸的紫外吸收 纯度鉴定：A260/A280 DNA=1.8;RNA=2.0 核酸 ：OD260 蛋白 ：OD280 酚类：OD320 ①DNA： ≈1.8 纯品 OD260/OD280 ＞ 1.8 RNA 污染 ＜ 1.8 pro 污染 ②RNA： OD260/OD280 ≈2.0 纯品 样品中如含有蛋白质及苯酚等杂质，此比值明显降低。 对于不纯的核酸样品：Agarose凝聚电泳，根据Marker判断 核酸含量测定： 双链DNA，1OD=50ug/ml; 单链DNA/RNA，40ug/ml; 寡核苷酸， 20ug/ml 3.3 核酸的变性和复性 3.3.1 核酸的变性（denaturation） 核酸的变性是指因某些理化因素的影响使维持核酸空间 结构的氢键和疏水键断裂，双螺旋结构解体，但不涉及核苷酸间共价键的断裂。 变性DNA在适当的条件下(除去变性因素)，可使两条分开的链按照碱基配对规律重新缔合成双螺旋结构，这一过程称为复性。 增色效应：是指核酸变性后，紫外吸收值增高。 此外，变性后DNA粘度降低，生物功能消失。 减色效应： 复性的DNA溶液紫外吸收下降称为减色效应。 核酸紫外吸收值比其各核苷酸成分的紫外吸收值之和 减少30％-40％的现象。 原态 变性 复性 可引起核酸变性的因素 破坏双螺旋稳定性的因素都可使DNA变性。 如高温、强酸、强碱、有机溶剂 (如乙醇、丙酮等)、尿素、酰胺等试剂、射线等。 高温：DNA稀盐溶液加热到80~100℃，几分钟内双螺旋键即解开，形成无规则的线团。 离子强度：提高溶液的离子强度，可中和DNA分子链上磷酸基团的负电荷，降低它们之间的排斥力，稳定DNA的结构。DNA通常保存在1mol NaCl中。 极端的pH值：pH﹤1时，DNA的磷酸二酯键会被水解；pH﹥11.3时，DNA的所有氢键断裂。 疏水作用：甲醇可增加碱基的溶解度，三氟醋酸钠可降低DNA分子疏水作用，破坏双螺旋结构引起变性。 尿素和甲酰胺：它们可与碱基之间形成氢键。前者常用于DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳时DNA的变性,后者常用于琼脂糖凝胶电泳中RNA的变性。 碱基堆积：氢键和碱基堆积是一致的，碱基堆积是一种协同作用