第05章 基因突变课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二 转座因子的结构特性 (一)原核生物的转座因子 1．插入因子 (IS) ◆是已知具有转座能力的最简单的遗传因子，长度大都小于2kb，最少的如IS1只有768bp。 ◆它们的一个共同特征是，末端都具有一段反向的重复序列(IR)，长度并不一定相等。例如IS10左边IR序列是17bp，右边是22bp。 ◆是由几个基因组成的特定的DNA片段。如 Tnp3系转座子：长度约为5000bp。末端有一对38bp的IR序列。每个转位子都带有3个基因:1个是编码对氨苄青霉素抗性的β–内酰胺酶(β–lactamase)基因，2个编码与转座作用有关的基因，TnpA和TnpR 2．转座子(transposons) 3. Mu噬菌体(Mu) 是大肠杆菌的温和噬菌体，溶源化后，能起到转座子的作用。和转座子一样，它也含有与转座有关的基因和反向重复序列。Mu能够整合进寄主染色体，催化一系列染色体重新排列。 (二)真核生物的转座因子 Ac因子：4563bp，带有两个与转座有关的基因。在两个基因末端还有两个不编码的序列，最后是由11bp的反向重复区。它通过由8bp的靶位点重复DNA与受体基因连接起来。 Ds因子大小差别很大。Ds9很象Ac，只是缺失3194bp。最小的Ds因子只有Ac长度的1/10，仅仅包括了Ac因子的未端反向重复区。 ◆转座机制研究最清楚的是细菌的转座子。转座子的转座一方面依赖于必要的结构—两端的IR序列，另一方面依赖于基因的作用。 ◆和转座有关的蛋白质一般都由转座子本身的基因所编码。转座过程是一个非同源重组过程，通过这一重组过程转座子出现在一个新的位置上，可是原来位置上的转座子并不消失。 ◆转座过程的确切机制还有待进一步研究 三 转座因子的应用 作为基因的标记克隆目的基因 本章重点： 基本概念 基因突变的一般特征 基因突变的分子基础 作业： 2、5、11、13 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 3. 核苷酸切除修复 大肠杆菌有6种酶参与： 2个uvrA基因（紫外损伤修复基因）与1个uvrB基因产物形成的UvrA2UvrB复合体，沿DNA移动查找损伤部位。一旦发现双螺旋扭曲（如TT），释放UvrB亚基，DNA吸引并结合UvrC（C基因产物）。 UvrB亚基在DNA损伤部位3’端4~5个核苷酸处水解切断。UvrC接着在损伤部位5’端8个核苷酸处切断。解旋酶II把12~13个核苷酸的寡核苷酸链以及UvrC从DNA上去除。 DNA聚合酶I填补缺口，并驱出UvrB。 留下的切口由DNA连接酶封闭。 (三）切除修复（excision repair） （四）双链断裂修复 一般只是简单地通过非同源末端连接过程将两个断裂末端拼接。非同源末端连接过程对断裂末端并没有特异性识别功能。 ★当细胞内存在两个以上断裂末端时，很可能发生错误重接导致染色体结构变异。 ★如果断裂末端存在核苷酸损失，为了保持连接双螺旋的结构正常，拼接前可能需将两个断裂末端切齐，从而导致碱基缺失突变。 带缺口的单链可以通过重组机制从完整双链获得修复所需要的序列信息，其主要步骤如图所示。 重组修复 （五）复制后修复 （六）SOS反应与倾向差错修复 大肠杆菌暴露在过量紫外线等诱变剂中，DNA分子产生大量缺口（单链）。此时RecA（与重组修复有关的酶）可以启动一种细胞反应——SOS反应。 高水平单链DNA可以激活RecA的蛋白酶活性，水解lexA基因产物——LexA蛋白（阻遏物）。 （六）SOS反应与倾向差错修复 LexA本身抑制recA、umuC、lexA、uvrA、uvrB、uvrD以及抑制细胞分裂的sulA、sulB等多个基因表达。 这些基因启动子中都含有一个共同序列称为SOS盒（SOS box）。LexA结合在SOS盒上抑制这些基因转录。 LexA水解后，具有SOS盒的基因转录表达，从而启动了细胞内多种修复机制。 SOS反应使RecA表达量上升约50倍；并诱导合成忠实性低的聚合酶，可以越过DNA损伤部位进行DNA复制以增加DNA结构完整性。 因此，由SOS反应启动的修复也被称为倾向差错修复（error-prone repair）。 当DNA结构损伤被修复后，单链DNA水平降低，RecA失活，LexA迅速积累，重新抑制SOS盒基因表达，结束SOS反应。 （六）SOS反应与倾向差错修复 一、物理因素诱变 (一)电离辐射诱变 第 六节 基