牛血清白蛋白,D34,DH34(阅读).docVIP

福州大学化学化工学院 本科实验报告 课 程 名 称： 综合化学实验 实验项目名称： 白蛋白与药物小分子复合物的制备及性能测试 实验室名称： 化学化工实验中心南楼401,402 学生姓名： 学号： 学生所在学院： 化学化工学院 年级、专业： 08化学二 实验指导教师： 2011年12月24号 一，实验目的 1.培养学生综合利用所学各分支基础知识开展科学研究的能力。 2.培养学生利用化学知识研究生命科学或药学相关问题的科研素养。 3.本综合实验需要学生融会贯通的关键知识或技能是： 电子吸收光谱和荧光光谱；（2）凝胶色谱；（3）研究小分子和生物大分子相互作用的方法 二，实验试剂和仪器 1 试剂 牛血清白蛋白；取代酞菁锌；PBS混合磷酸盐；葡聚糖凝胶G-100；DMF；DMSO。 2 仪器 紫外可见分光光度计；荧光光谱仪；鼓风干热消毒箱；移液枪. 三，实验方法 3.1 研究ZnPcDH34（或ZnPcD34）和BSA的相互作用，计算两者的结合常数和结合位点数。 （1）用PBS缓冲溶液（pH=7.4）配制以下溶液，放置于冰箱冷藏待用：0.5 mM ZnPcDH34（或ZnPcD34）溶液 1mL,并通过逐步稀释法配制2μM ZnPcDH34（或ZnPcD34）溶液 5mL；0.5 mM BSA溶液的10 mL，并通过逐步稀释法配制2μM BSA溶液的5 mL。 （2）室温下，用移液枪取2μM ZnPcDH34（或ZnPcD34）溶液 2mL于1cm石英比色皿中，逐次滴加BSA（0.5 mM）溶液（使体系中BSA浓度依次为: 0、0.2、0.4、0.8、1.6、2、4、8、16、20、22、24、28、30、36 μM），混匀后测定250～800nm的吸收光谱。记录ZnPcDH34（或ZnPcD34）在红光区（Q带）的最大吸收值，通过Amax对[protein]/[Pc]作图，初步分析酞菁与蛋白相互作用的结合情况及蛋白对酞菁光谱性质的影响。 (一）随BSA浓度的增加，DH34吸收光谱结果讨论： BSA加入到DH34（2μM）中，DH34随BSA浓度递增的吸收光谱变化如图1所示。 图1,在PBS中DH34随BSA浓度递增产生的吸收光谱变化图 光谱分析：光谱Q带由647nm,688nm双峰向698nm单峰移动，由相关文献可知，DH34主要以二聚体形式存在于溶液中，因此紫外吸收为双峰，当其和BSA复合时，二聚体解聚，主要以单体形式存在，其紫外吸收峰为698nm。当加入BSA后，随蛋白浓度的递增，位于698nm处的钛菁单体峰逐渐增大而位于647nm处的钛菁聚集体峰逐渐降低。说明BSA与DH34相互结合后，DH34由倾向于聚集体转变为单体。 将Q带的最大吸收值Amax对[BSA]/[DH34]作图，如图2。 图2，DH34在Q带的Amax随[BSA]/[DH34]的变化情况 由上图可看出，DH34在Q带的最大吸收Amax先随[BSA]/[DH34]的增大迅速增大，在[BSA]/[DH34]等于2左右时出现明显的拐点；当[BSA]/[DH34]大于2后逐步趋于平缓。说明DH34与BSA结合可能是定量的，且最后结合达到饱和其最大吸收值也趋于稳定。 随BSA浓度的增加，D34吸收光谱结果讨论 BSA加入到D34（2μM）中，D34随BSA浓度递增的吸收光谱变化如图3所示。 图3,在PBS中DH34随BSA浓度递增产生的吸收光谱变化图 光谱分析：由上图可看出，当加入BSA后，随蛋白浓度的递增，位于690nm处的钛菁单体峰虽有所增大但增大幅度很小，而位于650nm处的钛菁聚集体峰降低幅度也甚微。说明BSA与D34相互作用能力较差。 （3）室温下，用移液枪取2μM ZnPcDH34（或ZnPcD34）溶液 2mL于1cm石英比 色皿中，逐次滴加BSA（0.5 mM）溶液（使体系中BSA浓度依次为: 0、0.2、0.4、0.8、1.6、2、4、8、16、20、22、24、28、30、36 μM），混匀后测定记录ZnPcDH34（或ZnPcD34）在红光区的荧光光谱（650-850nm,激发波长为610-640nm），通过Fmax对[protein]/[Pc]作图，初步分析酞菁与蛋白相互作用的结合情况及蛋白对酞菁荧光光谱性质的影响。 （一）随BSA浓度的增加，DH34荧光光谱结果讨论： B